论文部分内容阅读
目的:结节性硬化症（TSC）临床表现形式复杂,即使突变位点相同,临床表现也可能完全不同。基因检测可以确诊该疾病,早期发现,及时诊断及有效地治疗可以提高本病预后。本文报道了4例TSC2基因突变致TSC患儿,其中1例为TSC2-PKD1邻接基因综合征,通过分析患儿的临床特点及治疗经过,进一步提高对该病的认识,有助于早期诊断及治疗。方法:选取4例TSC2基因突变的TSC患儿为研究对象,其中1例合并有TSC2-PKD1邻接基因综合征。收集详细的临床资料,主要包括患儿病史,全面查体,收集实验室检查结果,影像学资料。并对临床资料进行回顾性分析。利用二代测序技术行TSC基因（TSC1、TSC2）检测,明确突变位点。利用多重连接探针扩增（MLPA）技术对先证者TSC2基因进行检测,了解有无缺失片段。利用Sanger测序法对受检者及父母候选基因行一代测序验证。利用HGMD Pro及Pubmed数据库明确突变位点有无报道。参考1000Genomes、db SNP数据库,排除多态性变化。利用mutation Taster软件进行蛋白质损伤功能预测。先证者1利用Cyto One Array染色体微阵列芯片,根据比较基因组杂交技术的原理（a CGH）检测全基因组DNA拷贝数变异,明确缺失片段大小。结果:先证者1为2岁3月男童,主要表现为婴儿痉挛症、皮肤脱色斑、多囊肾、高血压及感染后血尿。颅脑MRI示脑室管膜下结节,脑电图示高度失律,肾脏超声示双侧多囊肾伴双肾增大。符合TSC临床诊断中两个主要标准:1.室管膜下结节2.色素脱失斑,及一个次要标准:多发性肾囊肿。利用MLPA检测TSC2基因发现12-42号外显子杂合缺失变异,该突变未见文献报道。先证者父母及姐姐TSC2基因未发现此变异,为新生突变。染色体微阵列核型分析显示arr 16p13.3（2,113,376-2,147,267）:患儿存在覆盖34kb的基因组DNA的大片段缺失,这种缺失包含TSC2外显子12-42以及部分PKD1外显子,基因诊断为TSC2-PKD1邻接基因综合征。先证者应用托吡酯治疗后仍有反复抽搐,加用雷帕霉素后抽搐缓解,双肾囊肿未见增大,肾功能无恶化。先证者2为2岁5月女童,主要表现为婴儿痉挛症、皮肤脱色斑。颅脑MRI提示脑室管膜下结节,3小时动态脑电图显示高度失律。符合TSC临床诊断中两个主要标准:1.皮肤脱色斑2.脑室管膜下结节。在受检者TSC2基因中发现c.4663-2A>G（位于编码区第4663号核苷酸的前内含子中倒数第2位核苷酸由A变为G）,为杂合剪切突变,该突变目前尚无文献报道。由于该病为常染色体显性遗传,经Sanger测序显示先证者父母及哥哥TSC2基因未发现此变异,考虑c.4663-2A>G为新生突变。给予托吡酯、德巴金、雷帕霉素治疗后,患儿抽搐次数明显减少。先证者3为2岁6月男童,主要表现为婴儿痉挛症、皮肤脱色斑。脑电图显示高度失律,颅脑MRI显示脑室管膜下结节。符合TSC临床诊断中两个主要标准:1.皮肤脱色斑2.脑室管膜下结节。在受检者TSC2基因发现c.4662+1G>A（位于编码区第4662号的核苷酸后内含子中第1位核苷酸由G变为A）的杂合核苷酸变异,为剪切变异,该位点致病性已有文献报道。经Sanger测序未发现先证者父母TSC2基因存在此变异,考虑c.4662+1G>A为新生突变。给予托吡酯及泼尼松治疗后,患儿抽搐次数减少。先证者4为2岁6月女童,主要表现为心律失常、心脏横纹肌瘤、癫痫发作及色素脱失斑。脑电图示右侧枕顶后颞区棘尖慢复合波,颅脑MRI示室管膜下结节,心脏超声示多发横纹肌瘤。符合TSC临床诊断中三个主要标准:1.皮肤脱色斑2.心脏横纹肌瘤3.脑室管膜下结节。在受检者TSC2基因中发现c.5246＿5259del（编码区第5246＿5259号核苷酸缺失）的杂合核苷酸变异,为移码突变。此突变导致第1749号氨基酸由精氨酸变为组氨酸,是首个发生改变的氨基酸,并在第21个氨基酸处停止翻译（p.Arg1749Hisfs Ter21）,该突变目前尚无文献报道;c.5259+1＿5259+13del（位于编码区第5259号核苷酸后内含子中1-13位核苷酸缺失）的杂合核苷酸变异,为剪切变异。经Sanger验证母亲未发现变异,先证者父亲该位点为杂合子,为家族性突变,突变来源先证者父亲。给予抗心律失常药物控制心律,并加用雷帕霉素治疗,随访1年后心脏横纹肌瘤消失,抽搐控制。结论:1.本文明确了4例TSC2基因突变,其中arr 16p13.3（2,113,376-2,147,267）、c.4663-2A>G、c.5246＿5259del为新发突变。根据美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）指南对变异进行生物学分析,上述TSC2基因突变均具有致病性。2.TSC表型高度可变,存在临床异质性。先证者4及父亲的TSC2基因发现了同一突变位点,先证者起病年龄早,病情重,先证者父亲仅有皮肤表现。3.TSC2-PKD1邻接基因综合征罕见,本文报道了国内首例婴儿期确诊患者。通过分析先证者1的临床特点,加深对该病的认识,有利于早期识别,避免漏诊。