【摘 要】
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罗望子有“东方神树”之称,其中罗望子多糖是目前国内外研究最多且最深入的组分,已在生产中得到广泛应用,而提取多糖后的废料,常被丢弃或是当做肥料使用,大大降低了罗望子的综合利用价值。本文以罗望子种仁提取多糖后的废弃物为原料,进行罗望子种仁球蛋白（Tamarind seed globulin,TSG）的提取,并对TSG的结构和功能特性进行研究,为TSG的开发利用奠定基础。本实验将传统碱溶酸沉法与超声辅助
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罗望子有“东方神树”之称,其中罗望子多糖是目前国内外研究最多且最深入的组分,已在生产中得到广泛应用,而提取多糖后的废料,常被丢弃或是当做肥料使用,大大降低了罗望子的综合利用价值。本文以罗望子种仁提取多糖后的废弃物为原料,进行罗望子种仁球蛋白（Tamarind seed globulin,TSG）的提取,并对TSG的结构和功能特性进行研究,为TSG的开发利用奠定基础。本实验将传统碱溶酸沉法与超声辅助法进行结合对TSG进行提取,以提高TSG的提取率,同时通过Osborn法对罗望子种仁清蛋白,盐溶蛋白,醇溶蛋白及谷蛋白分别进行提取,最终将碱溶酸沉提取后的TSG通过葡聚糖G-50凝胶层析纯化。通过对料液比,碱提p H,碱提温度,提取时间单因素试验,以蛋白提取率为考察指标对试验进行优化,最佳制备TSG的工艺参数为:料液比1:40（w:v）,碱提p H 12.5,提取温度65.0℃,提取时间90 min,250 W超声1 h,在等电点p H 4.6条件下室温25℃酸沉30min,TSG的提取率为68.43±0.87%（w:w）,碱溶酸沉和超声辅助提取法制备得到的TSG经葡聚糖G-50凝胶层析纯化后蛋白质含量为77.88±1.63%（w:w）,再经Osborn法测得罗望子种仁中清蛋白,盐溶蛋白,醇溶蛋白及谷蛋白的含量分别为3.18±0.54%（w:w）,1.31±0.56%（w:w）,0.44±0.23%（w:w）,15.31±0.72%（w:w）。对TSG的分子量及各级结构进行测定,TSG分子量主要分布在10 k Da～70 k Da之间,在13.83 k Da和35.34 k Da处左右的亚基含量较高。TSG中游离巯基含量为33.97±2.94μmol/g,二硫键含量为44.08±3.79μmol/g,并经傅里叶红外和圆二色谱对蛋白质二级结构三级结构进行研究,检测并计算各二级结构的相对含量,发现TSG中α-螺旋占27.36±0.40%,β-折叠占26.67±0.24%,β-转角占32.16±0.32%,无规则卷曲占13.81±0.19%,三级结构属α/β型蛋白。TSG经氨基酸分析仪检测到含氨基酸15种,其中必需氨基酸7种,占氨基酸总量的45.85%,且在所有必需氨基酸中异亮氨酸（Ile,占比16.08%）,苯丙氨酸（Phe,占比10.88%）及组氨酸（Met,占比9.11%）含量较高。以大豆分离蛋白为对照,进行TSG功能性分析,发现在p H 2.5处,TSG的起泡性和起泡稳定性较大豆分离蛋白均提高了1.35倍,而在其余p H环境中,TSG的起泡性,起泡稳定性和乳化稳定性不如大豆分离蛋白,不过TSG的溶解性和乳化性均优于大豆分离蛋白。为更有效合理的利用TSG,对蛋白的抗氧化性进行探究,体外实验结果表明,TSG对ABTS和DPPH的自由基清除能力较好,在10 mg/m L时其清除能力分别达到92.57%和99.32%,IC50值为5.64和3.26 mg/m L;浓度为10 mg/m L时TSG的FRAP总抗氧化能力为395.29μmol/L Trolox当量;脂质过氧化抑制率IC50值为12.84 mg/mL,TSG具有良好抗氧化能力。
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