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目的:应用Meta分析研究葡萄糖脑苷酯酶(glucocerebrosidase,GBA)基因L444P、N370S突变与帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发病风险的相关性,应用分子模拟技术探讨GBA基因L444P突变后结构、功能的变化,预测并验证其引起帕金森病的可能机制。 方法:⑴以核心词“Parkinson’s disease”或“PD”,“glucocerebrosidase”或“GBA”,以及“polymorphism”、“mutation”或“variant”检索Medline、Google Scholar与PubMed数据库;应用核心词“帕金森病”,“葡萄糖脑苷酯酶”,以及“多态性”或“突变”检索万方、CNKI等中文数据库,收集了2013年3月1日前发表的相关研究文献。应用Review manage5.0软件、Stata11.2软件对所纳入的文献进行合并分析。⑵应用swiss PDB view软件联合gromacs软件对GBA晶体结构进行改建,获得L444P突变体三维结构;应用Foldx、Discovery Studio、POPS等软件对比GBA与其L444P突变体稳定性、溶剂可及性和分子内氢键等的变化;应用分子对接技术分析突变后GBA与底物结合力的变化。⑶联合百草枯与代森锰腹腔注射建立C57BL/6小鼠PD模型,对比依达拉奉治疗前、后爬杆实验的变化,中脑自噬特异性标记物LC3Ⅱ、beclinⅠ表达的变化。 结果:①分析显示 GBA L444P突变在总体人群中总体效应检验Z=8.60,OR=9.98,95% CI=(5.91~16.85);在亚洲人群总体效应检验 Z=6.55,OR=12.01,95%CI=(5.71~25.29);在非亚洲人群总体效应检验Z=5.49,OR=7.92,95% CI=(3.78~16.59)。GBA N370S突变在总体人群中总体效应检验 Z=4.35,OR=3.70,95%CI=(2.,05~6.68);在非亚洲人群总体效应检验Z=4.35,OR=3.70,95% CI=(2.05~6.68);GBA N370S在亚洲人群正常对照与PD患者间突变率均为0。②GBA L444P突变后Leu444与Asn442之间的氢键丢失,而在ASP443与Asn442之间形成氢键,Leu444由疏水核心暴露到蛋白表面亲水区,总能量由62.7增加到79.27 kcal/mol;分子对接结果显示突变后对接自由能由-3.82下降到-2.24 kcal/mol,解离系数由1.57mM增加到22.88mM。③实验动物模型显示,PD小鼠中脑自噬标记物LC3Ⅱ、beclinⅠ表达量较正常组显著增强,依达拉奉治疗后表达降低,症状好转。 结论:⑴GBA L444P突变显著增加了帕金森病的易感性,在亚洲和非亚洲国家无地区差异。⑵GBA N370S突变显著增加了非亚洲国家帕金森病的易感性;而 GBA N370S不是亚洲人群常见突变位点。⑶GBA L444P突变后蛋白质稳定性降低,酶活性轻度减少。⑷自噬溶酶体通路障碍与帕金森病发病密切相关。因此,我们认为,GBA L444P突变后,GBA稳定性降低,阻碍了自噬溶酶体通路,引起帕金森病,调控自噬可能成为PD治疗的一个新的策略。