普通裂褶菌对甲板及毛发侵袭力的体外试验研究和电镜观察

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangwei_joy
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目的:普通裂褶菌(Schizophyllum commune)属担子菌亚门,层菌纲,伞菌目,裂褶菌科,裂褶菌属,被认为是一种条件致病菌。临床上与裂褶菌相关的病例报道,以深部感染(尤其是呼吸道的感染)较为多见。自1950年首次从甲真菌病患者的病甲中分离出裂褶菌后,未再发现有关裂褶菌导致甲真菌病的报道。此外,国内外尚无裂褶菌感染毛发的病例报道。须癣毛癣菌可侵犯皮肤、指(趾)甲以及毛发,是甲真菌病和头癣的常见致病菌。本试验通过建立体外透甲模型及改良毛发穿孔模型,以须癣毛癣菌作为阳性对照,旨在研究和探讨裂褶菌对甲板及毛发有无侵袭力,并在扫描电镜下观察裂褶菌对甲板和毛发的损伤程度,为临床诊疗提供指导,同时进一步提高对裂褶菌致病性的认识。方法:普通裂褶菌为河北医科大学第四医院皮肤科真菌室-80℃冰箱保存,该菌株分离自1例冠状动脉搭桥术后患者的痰液,并经中国科学院微生物研究所鉴定为裂褶菌(编号S-003);须癣毛癣菌标准株购自北京大学第一医院菌种保藏中心。指甲和毛发标本均由健康人提供,其中毛发标本来自4个不同年龄组(<2岁;2~13岁;14~18岁;>18岁)。透甲试验:制作甲板蜡块模型,将其随机分配到裂褶菌组和须癣毛癣菌组;每个模型均放置在沙氏液体培养基试管中,在蜡块模型中滴加菌悬液,使甲板腹侧面与菌悬液接触,背侧面与培养基接触,每组各设置一个阳性对照(将菌悬液直接滴加到液体培养基种)和一个空白对照(在蜡块模型中滴加等量的生理盐水),观察并记录各个模型的透甲时间,并应用相关统计学方法比较两组的透甲时间有无差异;取受侵的甲板在扫描电镜下观察裂褶菌和须癣毛癣菌对甲板的破坏程度及其菌丝和孢子的形态。改良毛发穿孔试验:将4个年龄组的毛发标本分置于沙氏琼脂培养基中,向毛发标本上滴加菌悬液,每根毛发滴3滴,空白对照标本滴加等量的生理盐水,将培养基放置于恒温箱中培养;接种菌悬液后3-34天,每天取数根毛发在显微镜下观察有无穿孔情况并记录各个标本发生毛发穿孔的时间;应用相关统计学方法比较不同组别间毛发穿孔时间有无差异;取受损的毛发标本在扫描电镜下观察,比较裂褶菌和须癣毛癣菌对毛发的破化情况。结果:透甲试验:裂褶菌能够穿透甲板,其透甲时间为2(1,3)天,须癣毛癣菌组的透甲天数为4(4,5)天,二者的透甲时间存在显著差异(P<0.01),裂褶菌的透甲时间短于须癣毛癣菌。在扫描电镜下,裂褶菌损伤的甲板角化细胞间出现较宽的裂隙,有菌丝穿入其中,背侧面可观察到菌丝从裂隙中穿出,部分角化细胞边缘翘起,细胞间出现缝隙;须癣毛癣菌损伤的甲板腹侧面可观察到角化细胞受侵蚀较重,细胞表面粗糙呈类似“蜂窝状”,细胞间形成较宽的裂隙,有菌丝穿入其中,背侧面可见扁平的角化细胞翘起,有孢子从其下方钻出。改良毛发穿孔试验:直至试验结束,均未观察到裂褶菌使毛发产生楔形缺损,但其能使毛发边缘发生“毛刷样”改变。比较同一年龄组、裂褶菌与须癣毛癣菌的毛发穿孔时间,四个年龄组均得出P<0.01,各个年龄组中裂褶菌发生毛发穿孔的时间均明显长于须癣毛癣菌。裂褶菌组中,不同年龄组之间的毛发穿孔时间存在差异,但进一步对各年龄组进行两两比较,差异无统计学意义。而须癣毛癣菌组中,不同年龄组间毛发发生穿孔的时间无差异。在光镜下,裂褶菌组和须癣毛癣菌组的毛发周围均有菌丝及孢子附着,裂褶菌组毛发破坏较轻,毛干边缘可见“毛刷样”改变,未见楔形缺损;须癣毛癣菌组毛发破坏较重,可见“毛刷样”边缘和典型的楔形缺损。在扫描电镜下,裂褶菌破坏后的毛发可观察到毛干表面有纵行裂隙,毛小皮边缘翘起、破碎,毛干皮质轻度受损。须癣毛癣菌破坏后的毛发损伤较重,毛发表面已无明显毛小皮样结构,毛干可见多个“虫蚀样”空洞。结论:1.裂褶菌能够穿透甲板,使甲板角化细胞间出现裂隙或空洞。2.裂褶菌可对毛发造成一定损伤。3.扫描电镜下,裂褶菌对甲板及毛发的破坏程度较须癣毛癣菌轻。
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