双清平化方对代谢综合征大鼠骨骼肌自噬通路mTOR、Beclin-1、LC3蛋白表达的影响

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目的 观察双清平化方对代谢综合征大鼠体重、Lee’s指数、血糖、血压、血脂及骨骼肌形态变化及自噬通路上标志性因子m TOR、Beclin-1、LC3蛋白表达的影响,探讨该方改善糖、脂代谢的作用机制。方法 高脂饲料加10%果糖水喂养,并联合应用N-硝基-L-精氨酸甲酯及链脲佐菌素诱导代谢综合征模型。随机分为模型组(MSD组)、二甲双胍组(MF组)、双清平化方高(SQPHF-H)、中(SQPHF-M)、低(SQPHF-L)剂量组,另设正常组(NC组),实验前后定期检测大鼠体重,计算Lee’s指数,测量血糖、血压;检测胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);观察代谢综合征大鼠模型的建立及双清平化方药物干预后的数值变化;苏木素-伊红(HE)染色观察骨骼肌组织病理形态学变化;Masson染色观察骨骼肌纤维形态变化;免疫组化检测(IHC)各组骨骼肌组织中LC3蛋白平均光密度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨骼肌组织中m TOR、Beclin-1、LC3蛋白表达水平。结果 1与正常组相比,模型组大鼠体重下降,饮水、纳食量增多,尿量增多,大便质软或稀溏,体毛杂乱,色泽枯槁,精神倦怠,懒动;正常组大鼠体重增加,纳食、饮水、尿量均正常,大便质地较硬,体毛顺滑白净,精神喜动;与模型组比较,二甲双胍组和双清平化方各组大鼠上述情况均有所好转。2模型组空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(PG2h)、TC、TG显著升高(P<0.01),与模型组相比,双清平化方组血清FBG、PG2h显著降低,胰岛素显著升高(P<0.01);与正常组相比,模型组血压、TC、TG显著升高,与模型组相比,二甲双胍组和双清平化方各剂量组TC、TG明显降低(P<0.01)。3骨骼肌HE染色显示模型组骨骼肌形态、数量、分布异常,提示模型组大鼠骨骼肌细胞受损、功能异常,马松染色出现增生的结缔组织,胶原纤维逐渐增多且肌纤维间距因胶原纤维的增生而变宽,免疫组化光度值明显低于其他各组,LC3自噬蛋白在细胞膜附着较少,自噬处于抑制状态;二甲双胍组和双清平化方低、中、高剂量四组HE染色显示较正常组骨骼肌细胞分布较松散,细胞核有内移,从马松染色结果看,较正常组胶原纤维存在量稍多。4骨骼肌组织中m TOR蛋白表达显著上调(P<0.01),Beclin-1、LC3蛋白显著下调(P<0.01)。结论 1双清平化方可下调MS大鼠的血糖、血脂水平,增强大鼠对糖负荷的耐受性,改善葡萄糖、脂代谢紊乱,纠正葡萄糖耐量异常的状况。2双清平化方可以改善骨骼肌的组织形态结构。3双清平化方可以改善MS大鼠骨骼肌氧化应激水平。4双清平化方可以改善代谢综合征大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与激活骨骼肌组织自噬通路中m TOR、Beclin-1、LC3蛋白表达有关。图 7 幅;表 6 个;参 146 篇。
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