实验室前期研究结果显示IRX5可抑制乳腺癌细胞的转移,对IRX5过表达细胞株进行转录组分析发现YWHAB基因与IRX5表达量正相关,推测二者之间存在潜在靶标关系。本实验通过双荧光素酶报告基因试验检测IRX5是否与YWHAB基因启动子区域相结合以探究IRX5对YWHAB基因表达的调控方式;通过构建YWHAB基因过表达细胞株,进而研究其生物学特性,探讨YWHAB基因与乳腺癌细胞发生、转移的关系。研究结果如下:1.通过荧光定量qRT-PCR结合转录组测序分析,筛选出可能与IRX5抑制乳腺癌相关的基因29个,其中上调表达基因18个,下调表达基因11个,结合其他肿瘤相关研究,推测YWHAB基因表达可能受IRX5调控,也是一个潜在的抑制乳腺癌转移的基因。2.通过软件JASPAR预测YWHAB基因启动子区中IRX5结合位点,利用PCR技术扩增出YWHAB基因启动子序列并将其成功克隆到PGL3-basic载体上,得到重组质粒（YWHAB-promoter-PGL3）。双荧光素酶报告实验结果显示与阴性对照组对比,pc DNA3.1-IRX5的导入可明显提高细胞内YWHAB-promoter-PGL3质粒上荧光素酶的表达量（P<0.05）。通过双荧光素酶报告基因证实IRX5确实可结合在YWHAB基因启动子区域并能调控其表达,说明IRX5能调控YWHAB的转录活性。3.通过PCR成功调出人源YWHAB基因的CDS序列并成功克隆到慢病毒包装载体PEB-3xflag-GP上,经测序无突变。将慢病毒重组质粒（PEB-3xflag-GP-YWHAB）转染293FT细胞获得病毒,通过病毒感染乳腺癌细胞MDA-MB-231,经嘌呤霉素筛选最终获得稳定过表达YWHAB基因的细胞株。4.与对照细胞相比,MTT结果显示YWHAB过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖能力无显著影响;细胞划痕和Transwell迁移实验结果显示YWHAB过表达细胞株的迁移能力显著降低,说明YWHAB基因过表达可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移;Transwell侵袭实验结果显示YWHAB过表达细胞株的侵袭能力显著下降,说明YWHAB过表达能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭。本研究结果揭示IRX5可能通过结合YWHAB基因启动子序列,直接调控YWHAB基因的表达,以影响乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移能力;明确了YWHAB基因过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、转移能力的影响,为乳腺癌转移机制的进一步阐明提供了一定的思路与基础,同时也为针对乳腺癌新方法的开发和靶向药物研发提供了理论基础。