香蕉（Musa spp.）是我国南方的重要经济作物之一,也是世界上重要的粮食作物。随着香蕉种植业的发展,病毒病已成为香蕉产量减产的限制因素之一,如香蕉条斑病毒（Banana streak virus,BSV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）和香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）。其中香蕉条斑病毒（BSV）属于杆状DNA病毒属（Badnavirus）成员。目前ICTV报道的BSV有9个种,基因组大小为7500 bp左右,由3个开放阅读框构成。其中ORFⅠ和ORFⅡ较小,分别编码20.8 k Da和14.7 k Da两个蛋白,但功能均不详。此外,BSV病毒不同种之间的基因组差异很大,具多态性。本研究为寻找中国地区的其他BSV株系,并初步对其ORFⅠ和ORFⅡ编码蛋白进行研究,这不仅为下一步研究BSV物种的多态性提供了序列资源,还为研究BSV及杆状DNA病毒ORFⅠ和ORFⅡ基因及编码蛋白的功能奠定基础。本研究克隆和获得了香蕉条斑病毒云南分离物（BSGFV-YN）的全基因组序列,并确定了BSGFV-YN的全基因组序列和其3个ORFs的结构特征。随后利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术探索BSGFV-YN的ORFⅠ和ORFⅡ蛋白之间的互作研究;同时通过农杆菌介导的转化方法将BSGFV-YN中的ORFⅠ和ORFⅡ分别和共同转入拟南芥植株中,获得含有ORFⅠ、ORFⅡ和共同的转基因植株,明确BSGFV-YN病毒蛋白异源表达对拟南芥表型的影响。具体结果如下:（1）BSGFV-YN全基因组克隆与序列分析。以实验室保存的感染BSV云南香蕉叶片总DNA为模板,根据BSGFV分离物已知序列（NC＿007002.1）设计7对特异性引物,PCR分别扩增BSGFV-YN全基因组各片段,克隆到p MD-18T载体并测序;通过Bio Edit软件将序列头尾拼接获得BSGFV-YN全长基因组。BSGFV-YN基因组长7325 bp,NCBI Gen Bank登录号为MN296502.1。序列分析表明,BSGFV-YN与BSGFV-Goldfinger株系的全基因组序列相似性为98.14%,而与其它BSV株系的相似性在49.10-57.09%之间。利用全基因组和ORFⅢ多聚蛋白分别构建系统发育树,结果表明BSGFV-YN与其它BSV株系属于同一个大的分支,其中与BSGFV-Goldfinger进化关系最近。尽管BSGFV-YN与BSGFVGoldfinger高度同源,但是它们的宿主品系明显不同,前者的宿主为Cavendish Musa AAA group,而后者的宿主为Goldfinger Musa AAAB group。进一步分析这两个病毒株系的非编码序列,发现BSGFV-YN在ORFⅠ和ORFⅢ的基因间隔区比BSGFV-Goldfinger多出一段含有多个重复序列的区域,暗示该区域可能与BSGFV的宿主选择有关。（2）ORFⅠ和ORFⅡ互作验证。利用酵母双杂交系统分别构建了含ORFⅠ的激活域载体（p GBKT7-ORFⅠ）和含ORFⅡ的诱饵域载体（p GADT7-ORFⅡ）,并进行毒性和自激活活性检测,实验结果表明激活域蛋白对酵母无毒性和无自激活活性。将重组质粒（p GBKT7-ORFⅠ和p GADT7-ORFⅡ）共同转入到酵母菌株（Y2HGold）中,通过含有X-α-Gal的SD-Leu-Trp-His培养基筛选得到含有p GBKT7-ORFⅠ和p GADT7-ORFⅡ的阳性克隆菌株,表明BSGFV-YN ORFⅠ与ORFⅡ发生相互作用。为进一步验证ORFⅠ与ORFⅡ的相互作用,利用荧光双分子互补技术对其进行互作验证。构建荧光双分子互补表达载体（YN1-ORFⅠ和YC1-ORFⅡ）,分别转入到农杆菌感受态细胞（GV1301）,共同注射烟草叶片背面进行瞬时表达,3天后进行荧光共聚焦显微镜观察,结果发现在烟草细胞的细胞质观察到绿色荧光,表明ORFⅠ和ORFⅡ在烟草细胞中发生互作。（3）ORFⅠ和ORFⅡ亚细胞定位分析。构建重组植物表达载体（GV1300-ORFⅠ和GV1300-ORFⅡ）,将重组植物表达载体分别转入农杆菌感受态细胞（GV1301）,并注射烟草叶片使重组载体瞬时表达,3天后用荧光共聚焦显微镜对叶片进行观察,荧光共聚焦显微镜观察到ORFⅠ和ORFⅡ均定位在细胞质中。进一步说明ORFⅠ和ORFⅡ蛋白在植物细胞质中相互作用并发挥生物学功能。（4）ORFⅠ和ORFⅡ表达对拟南芥表型的影响。将重组植物表达载体（GV1300-ORFⅠ和GV1300-ORFⅡ）,分别转入农杆菌感受态细胞（GV1301）,将菌液重悬转入到拟南芥植物中,经抗性筛选,获得T3代转基因拟南芥植株。表型观察和统计学分析表明,含有转ORFⅠ基因拟南芥植株没有呈现特殊的症状表型,而含有ORFⅡ和ORFⅠ+ORFⅡ共同基因拟南芥植株表现出莲座叶多、出现叶片变多等症状表型。本研究结果丰富了不同宿主来源的BSV全基因组序列,为下一步研究BSV物种的多态性与宿主选择进化关系提供了序列资源。同时开展了BSGFV-YN病毒蛋白功能初步研究,明确ORFⅠ和ORFⅡ在植物细胞质中相互作用并发挥功能及其异源表达对拟南芥表型的影响。