红景天多糖提取、结构表征及抗肿瘤活性研究

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红景天(Rhodiola rosea L.)是一种药食两用的植物,可用于治疗肝炎、强身健体、延缓衰老。研究发现红景天多糖自身具备着较多的生理活性,其中包括它自身的抗氧化性、抗肿瘤性、同时也可以提高免疫力、抵抗衰老等。目前,对于红景天多糖的提取方法主要是超声、微波等辅助热水提取或碱浸提法,然而长时间的热处理和碱液浓度无法控制极易引起红景天多糖结构的改变甚至降解,导致其原有化学结构的改变,进而影响其生物活性。另外红景天多糖对肝癌细胞的影响鲜有研究。因此,为了尽可能的保护多糖结构并维系其生物活性,本课题采用温和的冷水提取条件来提取红景天多糖,分离出均一组分RLP并研究其结构、理化性质及体内抗肿瘤机制。本课题以红景天根茎为原料,采用4±1℃的温度对红景天多糖进行提取,并优化提取条件。通过理论和经验结合的方法确定了优化后的提取工艺,其料液比为1:25,提取次数2次,提取时间选定为12 h,醇沉浓度选定70%。之后通过Sevag法除蛋白以及Sephadex G-200层析柱分离纯化,可以得到一种均一组分RLP,纯度为92.35±0.21%且相对分子量为1.15×10~6 Da,糖醛酸含量为27.68±0.45%。RLP由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸组成且摩尔比为1:3.33:3.07:5.62:0.49:0.32:4.50,表明RLP为一种酸性多糖。红外和核磁结果表明RLP主要由→2,4)-α-Rha(1→,→5)-α-L-Araf-(1→,α-D-Glu,→6)-β-D-Galp-(1→,β-D-Man和→4)-α-Galp A-(1→组成。理化性质结果说明红景天多糖稳定性较好且溶液黏度受温度、质量浓度、盐离子等因素的影响。本课题建立了H22荷瘤小鼠模型,结果表明低剂量(100 mg/kg)和高剂量(300 mg/kg)红景天多糖对H22实体瘤细胞的抑制率分别为23.59%和45.52%,并且可以提高荷瘤小鼠免疫器官指数。细胞周期分布,AV-FITC/PI和JC-1试验结果表明红景天多糖能够通过破坏癌细胞的线粒体膜电位将癌细胞的细胞周期阻滞于S期,从而诱导H22细胞自身的凋亡。综上所述,本课题为红景天多糖作为一种潜在的抗肝癌药物或者在药物传递领域的理论研究奠定基础。
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