蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系的建立

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蝉拟青霉是麦角菌科拟青霉属真菌,其寄生于蝉的若虫后形成的复合体即为我国传统中药蝉花,其味甘,入肺、肝二经,具有免疫调节和抗肿瘤活性,临床应用广泛。因蝉拟青霉中活性成分的含量不亚于天然蝉花,所以人工培养蝉拟青霉以代替天然蝉花成为研究的热点之一。已有部分研究工作采用普通营养基质对蝉拟青霉进行固体培养或深层发酵,以获得蝉拟青霉子实体或菌丝体,鲜有将蝉拟青霉与中药进行配伍研究的报道。将蝉拟青霉作为发酵菌种,对中药材进行发酵,一方面可以利用中药中的营养为蝉拟青霉的生长提供营养要素,另一方面可利用蝉拟青霉的生长代谢对中药所含成分进行转化,从而实现增效减毒的作用,同时发挥蝉拟青霉与中药的协同作用。黄芪是常用中药之一,具有显著的免疫调节和抗肿瘤活性,其活性成分包括黄酮类、多糖、黄芪皂苷等成分,在医疗、保健领域有着广泛的应用。由于黄芪用量巨大而产生了大量的黄芪药渣。实验研究表明,黄芪经提取后所得黄芪药渣中仍然含有较多的活性成分和较高的营养价值,而目前对黄芪药渣的处理多为填埋和堆肥等低效益高污染的处理方式,对药渣的无害化和高效益处理成为亟需解决的问题之一。鉴于蝉拟青霉与黄芪具有相近的功效,本文拟建立蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系及蝉拟青霉/黄芪药渣双向发酵体系,并对发酵过程中多糖、总黄酮及总皂苷等主要活性成分的含量进行测定,进而对其药用性能进行初步评估,以期获得具有更高药用价值的药材或药渣菌质,同时为黄芪药渣高效、环保利用提供新思路和方法。本文的主要研究内容如下:(1)以生物量为指标,对蝉拟青霉深层发酵过程的温度、接种量、发酵时间等因素进行了考察,确定蝉拟青霉最优生长条件,为建立蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系奠定基础。(2)分别采用黄芪药材及黄芪药渣与蝉拟青霉建立双向发酵体系,以虫草酸含量为指标对双向发酵体系进行正交设计优化;采用化学比色法对发酵过程中的多糖、总黄酮及总皂苷含量的动态变化进行了分析,结果表明蝉拟青霉/黄芪药材及蝉拟青霉/黄芪药渣发酵体系中均存在物质转化,证实该发酵体系是合理可行并具有研究价值的。(3)基于双向发酵体系化学成分的变化,对蝉拟青霉/黄芪药材及药渣双向发酵体系开展了抗氧化、免疫及抗肿瘤的药效研究。结果表明,双向发酵所得黄芪药材菌质及黄芪药渣菌质的DPPH自由基清除率和亚铁离子螯合能力均得到提高;两种双向发酵菌质均可促进巨噬细胞对中性红的吞噬作用;黄芪药材菌质及黄芪药渣菌质多糖对肿瘤细胞MCF-7的抑制作用较发酵前均得到提高,且抑制作用呈浓度依赖性。上述结果表明,采用药用真菌蝉拟青霉对黄芪及其药渣的发酵有积极意义。黄芪经蝉拟青霉发酵后,活性成分含量发生显著变化,药理活性也得到显著增强,说明经过蝉拟青霉发酵的黄芪药材具有更好的药用价值;而对于发酵黄芪药渣而言,尽管其活性成分的绝对量低于发酵的黄芪药材,但因其发酵后活性成分提高显著,并且具有较好药理活性,因而采用蝉拟青霉发酵的黄芪药渣在药用或兽药领域也具有潜在的应用前景。
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