人体肠道内具有非常广泛的微生物种类,其中也包括各种的致病菌,这些致病菌在一定数量范围内与乳酸菌等其他菌群保持微妙的平衡,同时影响生命健康。乳酸菌是普遍意义上的益生菌,具有多种益生功能,如改善和维持机体免疫系统、产生抗菌物质、增强粘膜屏障功能等等。然而随着研究的进一步深入,人们发现益生菌在人体内存在的角色是多面的,例如产生过量的生物胺,或发生菌易位穿越肠道屏障造成菌血症等,这提示我们对乳酸菌要有新的认识。抗生素是常用于临床治疗的治疗手段之一,由于对抗生素的过度依赖,细菌耐药效应越来越显著。然而当抗生素作用时,肠道内的致病菌是如何逐步形成耐药性,在这个过程中同处一个环境下的乳酸菌担任着什么样的角色值得令人深思,目前还没有研究能给出答案,因此本研究就乳酸菌对食源性致病菌形成耐药性作用的影响机制进行初步探究。本研究选用两歧双歧杆菌WBBI03和植物乳杆菌WLPL05作为乳酸菌的代表,选用单增李斯特菌CMCC54001及大肠杆菌O157:H7等作为食源性致病菌的代表,探究在不同浓度抗生素作用下,乳酸菌与食源性致病菌共孵育作用对食源性致病菌耐抗生素作用的影响。实验就氨苄西林（10 ug/mL、25 ug/mL、50 ug/mL、100 ug/mL）、氯霉素（4 ug/mL、8 ug/mL、16 ug/mL、32 ug/mL）、卡那霉素（2ug/mL、5 ug/mL、10 ug/mL、20 ug/mL）分别进行了研究,结果表明,在三种抗生素的环境下,共孵育作用能够有效降低单增李斯特菌CMCC54001的死亡率,低浓度下增加了近10%-30%的存活率。为证实这一结论的普遍性,本研究还探讨了大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌与植物乳杆菌在三种抗生素背景下的作用,并得到了与单核增生李斯特菌CMCC54001耐药性增强的相同结论。为了解抗生素在菌体相互作用过程中含量的变化,本研究利用高效液相色谱对氨苄青霉进行检测,结果表明,孵育前后氨苄青霉素总含量不发生变化,说明乳酸菌与食源性致病菌没有对青霉素产生分解作用。但接下来通过检测菌体表面结合的氨苄青霉素,发现共孵育后结合的氨苄青霉素含量有所下降,推测益生菌与致病菌相互作用后,可能影响了致病菌表面上涉及抗生素的受体蛋白（如PBP1蛋白等）分布和结合抗生素的能力,使致病菌结合到的抗生素数量减少,最终提高了致病菌的耐药性。为进一步探究乳酸菌对食源性致病菌增强耐药作用的相关机制,本研究通过iTRAQ和Label-free蛋白组学定量分析分别对两歧双歧杆菌WBBI03与单增李斯特菌CMCC54001共孵育,植物乳杆菌WLPL05与大肠杆菌O157:H7孵育后的蛋白组学变化。iTRAQ结果总共鉴定出1328个蛋白,其中涉及翻译、核糖体结构和生物起源,碳水化合物的运输和代谢、氨基酸的运输和代谢相关蛋白的表达活性最高;同样的,Label-free结果表明,大肠杆菌O157:H7共孵育之后,在被鉴定出的蛋白中,参与细胞内蛋白翻译,核糖体结构和生物起源（biogenesis）相关的蛋白异常活跃,占有量达到237个,并且碳水化合物运输和代谢,氨基酸的转运和代谢各占176个,能量产生相关的基因也占到175个。最后我们通过荧光定量PCR对部分涉及耐药性的差异蛋白相关基因进行检测,结果中上调节的基因有luxs、gpmA和FAZ83-04550,zapB与FAZ83-19295表达下调。Luxs作为大肠杆菌的群体感应作用相关调控基因,其表达上调与蛋白组学结果中群体感应蛋白在孵育前后发生显著上调相对应。同时,共孵育作用促进了单核增生李斯特菌CMCC54001 GpsB上调,从而不仅影响了菌体细胞壁分裂,还可能阻断抗生素与PBP的结合。综合以上,乳酸菌与食源性致病菌共孵育,促进了食源性致病菌的群体感应作用,调节了GpsB的表达,阻断了食源性致病菌与抗生素的结合,进而促进了食源性致病菌对β-内酰胺类抗生素的耐药表现。本研究首次就乳酸菌对食源性致病菌的耐药作用机制进行探究,深入评估了乳酸菌可能的风险性,有助于乳酸菌对致病菌的基因调控网络模型的建立,揭示乳酸菌与致病菌相互作用的分子机制,进而全面了解肠道中各种微生物的功能,帮助人们更全面的认识益生菌及食源性致病菌。