【摘 要】
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为研究室间隔缺损修补术患儿体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)前后中性粒细胞自噬水平的变化,及其对细胞存活率的影响,本研究以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿12例为CPB组,超声引导下室间隔缺损外科微创封堵术患儿12例为对照组(N-CPB组)。分别采集T0(麻醉诱导后)、T1(CPB后/封堵器置入成功后)血液标本5 mL,分离中性粒细胞,用Western blot检
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为研究室间隔缺损修补术患儿体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)前后中性粒细胞自噬水平的变化,及其对细胞存活率的影响,本研究以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿12例为CPB组,超声引导下室间隔缺损外科微创封堵术患儿12例为对照组(N-CPB组)。分别采集T0(麻醉诱导后)、T1(CPB后/封堵器置入成功后)血液标本5 mL,分离中性粒细胞,用Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II、p62的表达,采用实时定量PCR(quantity real-time reverse transcription PCR,RT-qPCR)法测自噬相关基因Atg-5的mRNA表达水平。结果显示,与T0相比,CPB组T1时中性粒细胞Beclin-1、LC3-II表达明显升高(P<0.05),而N-CPB组无明显变化;CPB、N-CPB组T0、T1时刻均未检测到P62的表达;与T0相比,CPB组T1时中性粒细胞Atg-5表达降低(P<0.05),而N-CPB组无明显变化;另以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿6例为研究对象,于T0、T1时采集血液标本5 mL,分离中性粒细胞,分别分为对照组和3-MA(自噬抑制剂)组,分别于0、1、2、4、8 h经台盼蓝染色检测存活率。结果显示,与T0比较,来自T1的中性粒细胞存活率在0、1 h时显著升高(P<0.05);加入抑制剂三甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后,T0和T1来源的中性粒细胞存活率均迅速降低(P<0.05);与对照组比较,3-MA组2、4、8 h时存活率显著降低(P<0.05)。该研究表明,首先CPB使室间隔缺损修补术患儿中性粒细胞自噬蛋白水平升高,并可能通过反馈调节降低自噬基因的表达;其次,CPB后中性粒细胞存活时间延长,且抑制自噬能缩短细胞存活时间。
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