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背景与目的:支架蛋白JNK相关亮氨酸拉链蛋白(JLP)是一介导JNK和p38MAPK信号分子的公共平台,与多个蛋白、激酶与转录因子相互作用,在细胞迁移与分裂、细胞凋亡、神经突增生与丧失、骨骼肌细胞分化和CD40受体内化中具有重要调控作用。经典钙黏蛋白如E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、R-钙黏蛋白等具有细胞粘附及信号传递功能,其中N-cadherin仅存在于正常成人的近端肾小管上皮细胞及HK-2细胞质中,肾小管上皮细胞TGF-β异常激活及转分化与N-cadherin的作用相关。本实验组前期发现,JLP特异性表达在小鼠肾小管,jlp基因缺失单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化加重。目前,JLP是否调控上皮间质转化(EMT)、JLP与N-cadherin在近端肾小管是否有交互作用以及JLP是否影响N-cadherin表达等重要问题仍未阐明。鉴于此,本文旨在探讨支架蛋白JLP缺失在肾小管上皮细胞EMT中的作用及机制。方法:1、随机将野生型(jlp+/+)和jlp基因敲除(jlp-/-)小鼠分为假手术(Sham)组和单侧输尿管梗阻(UUO)组,于术后7d处死小鼠。Westernblot及RT-PCR检测肾组织JLP、E-cadherin、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子(TGF)-β1蛋白及mRNA表达。免疫组化检测肾组织Col-Ⅰ、α-SMA、FN及TGF-β1表达。2、采用jlp-shRNA构建jlp基因敲除的HK-2细胞模型。随机将阴性对照细胞和jlp-shRNA转染细胞分为成纤维细胞生长因子(FGF-2)刺激前组和FGF-2刺激后组。Western blotting检测各组细胞JLP、E-cadherin、TGF-β1、α-SMA、pP38MAPK、N-cadherin表达;免疫荧光检测FGF-2刺激24h后各组α-SMA、COL-Ⅰ、FN表达。免疫沉淀检测正常HK-2细胞JLP与N-cadherin相互作用;免疫荧光检测各组JLP与N-cadherin表达。结果:1、与jlp+/+Sham小鼠比较,jlp+/+UUO和jlp-/-UUO小鼠肾组织E-cadherin蛋白及mRNA均明显下调,且jlp+/+ UUO小鼠肾组织JLP蛋白及mRNA也明显下调;jlp-/-UUO小鼠较jlp+/+UUO小鼠肾组织α-SMA、COL-Ⅰ、FN、TGF-β1蛋白及mRNA明显上调,免疫组化染色显示类似表达。2、与阴性对照细胞比较,FGF-2刺激后的细胞中E-cadherin、JLP蛋白均明显下调;FGF-2刺激后的jlp-shRNA转染细胞较FGF-2刺激后的对照细胞TGF-β1、α-SMA、pP38MAPK蛋白明显上调,同时α-SMA、COL-Ⅰ、FN荧光表达也明显上调;3、与阴性对照细胞比较,FGF-2刺激后的对照细胞N-cadherin蛋白明显上调;jlp-shRNA转染细胞于FGF-2刺激前后均出现N-cadherin蛋白明显下调;JLP与N-cadherin在正常HK-2细胞中共沉淀;免疫荧光显示:阴性对照细胞中JLP与N-cadherin在胞浆共定位;FGF-2刺激24h后,对照细胞JLP表达明显减弱,N-cadherin在细胞膜外表达明显增强且分布不均,JLP与N-cadherin在胞浆共定位明显减弱;jlp-shRNA转染细胞于FGF-2刺激前后,N-cadherin表达均明显减弱。结论:在肾间质纤维化模型中,支架蛋白JLP缺失可过度活化TGF-β、p38 MAPK信号促进肾小管EMT;JLP缺失可导致N-cadherin介导的粘附障碍,促进肾小管EMT。