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目的 运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察IL-27两个亚单位EB工3mRNA和P28 mRNA在慢性EAE模型C57BL／6小鼠脑和脊髓动态表达变化，探讨其在EAE发病机制中的作用。
方法 72只近交系无特定病原体(SPF)级8-lO周健康雌性C57BL／6J小鼠，体重18-22克，随机分为空白对照组、佐剂组和模型组。模型组中发病小鼠又分为发病前、发病初、发病高峰和慢性期组。用人工合成的MOG35-55和自制的完全弗氏佐剂免疫C57BL／6J小鼠制成慢性EAE动物模型，每只小鼠注射0.2ml，其中含人工合成的MOG<,35-55>300ug，完全福氏佐剂2mg，分4点皮下注射，基础免疫1周后用同样剂量加强免疫一次；免疫当天和48小时后每只小鼠经尾静脉注射百日咳毒素0.5mg。免疫当天定为第0天起至第32天实验终止前，每天8AM-8PM观察动物行为活动，采用盲法，每天2人至少一次在同一时间称体重并按Benson评分标准做EAE严重性的临床评估，模型的成功与否主要根据Benson评分标准判定和病理学检查，结合MR工结果综合评价；RT-PCR技术观察空白对照组、佐剂对照组和模型组发病前、发病初、发病高峰和慢性期组脑和脊髓EBl3mRNA和P28 mRNA的表达变化。
结果
1．动物模型
慢性EAE模型累计成功率为83.3％，死亡率为8.3％，模型组
在第一次免疫后14-20天发病，20-24天达高峰，28-32天缓解，发病小鼠体重明显减轻；空白对照组和佐剂对照组体重呈增加趋势，Benson标准评分为0分。发病小鼠HE和Weil氏髓鞘染色示小血管周围炎症细胞浸润和髓鞘脱失；1.5T头部和脊髓扫描发现，EAE组病变在MRI冠状切面，横断面T2加权像及水抑制像可见多个散在长T2高信号，但在T1加权像及脊髓信号不易辨认。2.RT-PCR分别计算EBl3的光密度值／β-actin的光密度值比值和P28的光密度值／β-actin的光密度值比值。
空白对照组小鼠脑和脊髓EBl3 mRNA和P28 mRNA的表达与佐剂对照组小鼠脑和脊髓EBl3 mRNA和P28 mRNA的表达相比差异无统计学意义(P>0.05)。
2.1 P28 mRNA的表达变化：
对照组小鼠脑和脊髓仅有低水平的P28 mRNA表达。MOG35-55免疫C57BL／6小鼠诱导的慢性EAE模型小鼠在发病初即可见CNS中P28 mRNA表达升高，并且一直持续至发病高峰期与慢性期；而且，与发病初期比，发病高峰期、慢性期P28 mRNA的表达水平较高(与对照组相比均有统计学意义，P<0.01)。
2.2 EBl3 mRNA的表达变化：
对照组小鼠脑和脊髓仅有少量EBl3 mRNA表达。MOG35-55免疫C57BL／6小鼠诱导的慢性EAE模型小鼠在发病初即可见CNS中EBl3 mRNA表达升高(与相比均有统计学意义，P<0.01)；发病高峰时表达达高峰(A3与对照组相比有统计学意义，P<0.01)，慢性期时开始下降但仍持续高于对照组(A4与对照组相比有统计学意义P<0.0l和P<0.01)水平。 结论：
1．用MOG35-55免疫C57BL／6J小鼠制成的慢性EAE动物模型，有发病率高，可靠的特点，可作为研究MS的理想动物模型。
2．IL-27有可能在早期促进EAE发病并参与慢性阶段的炎症反应。