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近年来,随着人们生活水平的不断提高,饮食结构发生了巨大变化,尤其是对各种高脂高糖食物的摄入量过多,导致脂代谢异常,从而引发肥胖、动脉粥样硬化、癌症和心血管等疾病发病率逐年上升,严重危害人类健康。目前市面常见的减肥药效果不佳,且有很多副作用,引起人体多种不良生理反应。因此,探寻一种天然的、安全有效的药食同源类降脂减肥产品具有重要的现实意义。我国榛子资源丰富,其中吉林长白山地区为主产区之一。榛子果仁具有很好的食用和药用价值,营养丰富,总蛋白含量占20%左右,富含8种人体必需氨基酸,是一种优质的天然植物蛋白活性肽的来源。本研究以长白山野生榛仁分离蛋白为原料,采用单因素及响应面法对其酶解工艺进行优化;通过超滤、凝胶层析、反相高效液相和飞行质谱对活性肽进行分离纯化和结构鉴定;对合成的氨基酸肽段进行降脂活性验证及作用机制研究。具体实验结果如下:通过单因素试验和响应面试验优化得到Alcalase2.4L酶解榛仁蛋白的最佳条件:底物浓度2%,酶解温度54℃,加酶量10422 U/g,pH9.4,酶解时间150 min。该条件下榛仁蛋白,水解度为36.42%,胰脂肪酶抑制率为42.97%,接近预测值。以胰脂肪酶抑制率、胆固醇胶束吸附率以及3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中脂质水平为指标,采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15、反相高效液相色谱(PR-HPLC)及质谱对榛仁蛋白降脂活性肽进行分离纯化及结构鉴定。榛仁蛋白酶解液经超滤得到降脂效果最佳的组分A3(<3 kDa),A3经Sephadex G-25和Sephadex G-15纯化后得到了胰脂肪酶抑制率、胆固醇胶束吸附率以及细胞降脂活性均较高的C3组分。C3组分进一步经反相高效液相色谱纯化及质谱解析筛选出9个肽段进行固相合成。通过细胞试验得到可抑制20%以上总脂形成的多肽有Rrg-Leu-Leu-Pro-His(RLLPH)(38.16%)、Val-Leu-Leu-Rrg-Leu(VLLRL)(20.14%)、Gly-Val-Leu-Leu-Rrg-Leu(GVLLRL)(23.16%)和Phe-Leu-Leu-Pro-His(FLLPH)(26.31%)。基于AMPK/ACC细胞信号通路研究合成肽RLLPH的降脂减肥机理:RLLPH可磷酸化AMPK以激活AMPK信号通路,通过抑制PPARγ、C/EBPα和aP2的表达抑制了脂肪细胞的分化,同时SREBP-1c、FAS、ACC1、HMGCR等因子的mRNA表达受到抑制,以此降低脂肪酸和胆固醇的合成来降低脂肪细胞中脂质的积累,从而达到降脂减肥的效果。本研究明确了榛仁蛋白活性肽的降脂减肥活性,并初步探明了其可能作用机制,为我国长白山野生榛子资源的深度开发和综合利用提供了重要的理论参考。