【摘 要】
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中药银柴胡(Stellaria dichotomaL.var.lanceolata Bge.)是宁夏道地药材,随着其活性成分研究逐步深入,甾醇类、生物碱、黄酮类,挥发油类等化合物及其药理作用不断被发现,但其提取方法多为有机溶剂萃取法,不利于银柴胡产业化生产。因此,为深入挖掘银柴胡中的药效物质,扩大资源开发利用途径,本项目研究了银柴胡超临界萃取技术,并在单因素实验的基础上,采用响应面法对萃取工艺进行
【基金项目】
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宁夏重点研发计划项目(2021BEG02042)
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中药银柴胡(Stellaria dichotomaL.var.lanceolata Bge.)是宁夏道地药材,随着其活性成分研究逐步深入,甾醇类、生物碱、黄酮类,挥发油类等化合物及其药理作用不断被发现,但其提取方法多为有机溶剂萃取法,不利于银柴胡产业化生产。因此,为深入挖掘银柴胡中的药效物质,扩大资源开发利用途径,本项目研究了银柴胡超临界萃取技术,并在单因素实验的基础上,采用响应面法对萃取工艺进行优化,获得超临界CO2萃取的最佳条件,并应用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对萃取物成分进行了鉴定;在此基础上对萃取物的抗氧化活性、对小鼠特应性皮炎的疗效进行了研究,研究结果如下:1.通过单因素实验考察了萃取压力、温度、时间三个关键因素对萃取物得率的影响,确定最佳萃取参数范围;在此基础上,结合响应面法进一步优化萃取工艺参数,最终确定银柴胡超临界CO2最佳萃取工艺参数为:萃取压力35 MPa,温度47℃,时间为3 h,实际得率为 0.332%±1.31%。2.采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对萃取物鉴定结果表明:共计鉴定到2542个脂质分子,可划分为7大类、29亚类;其中固醇类成分的相对含量最高为88.29%,其次为甘油脂类成分相对含量为10.69%,其他类成分均低于10%。此外首先发现银柴胡中含有神经酰胺类成分。3.经测定比较,银柴胡超临界萃取物具有一定抗氧化作用。对DPPH、ABTS自由基的清除率随着萃取物浓度增加而增强,呈现良好的剂量效应关系;与同样浓度的Vc作用相比,银柴胡超临界萃取物对DPPH自由基清除能力与Vc相当,最高达到为95.63%,IC50为5.933 mg/mL;而对ABTS自由基的清除率略低于Vc,最高达到89.84%,IC50为1.914mg/mL。4.银柴胡超临界萃取物对小鼠特应性皮炎(AD)的研究结果显示:对特应性皮炎具有一定的治疗作用。通过采用不同处理剂量试验发现,当治疗组剂量达到120mg/天、240 mg/天时,与模型组相比能够显著减少小鼠的抓挠次数及降低皮损评分(p<0.01),小鼠皮损处红斑、水肿、干燥脱屑等症状基本消退,结痂脱落。而模型组小鼠皮肤依旧表现出局部红斑、水肿,干燥脱屑和结痂的症状。进一步对2组小鼠进行了组织病理观察,结果显示:模型组皮损处角化过度伴有角化不全,上皮层棘细胞增生,基底层有大量炎细胞浸润,真皮层血管扩张充血等症状。而给药剂量达到120mg/天、240 mg/天时治疗组较模型组角质层大部分正常角化,棘细胞明显变薄,少量炎性细胞浸润;根据症状改变,为了探明萃取物的可能作用机制,对小鼠血清中IgE、IFN-γ、IL-4及皮肤组织中的HSD3B1、TNF-α及IL-4蛋白表达水平进行了测定,结果显示:当治疗组施用萃取物剂量高于60 mg/天时,血清中IgE、IFN-γ、IL-4水平相比AD组显著降低(p<0.05);同样的,治疗组剂量为120mg/天时,小鼠皮肤组织中HSD3B1、TNF-α及IL-4蛋白表达水平也显著低于模型组(p<0.05)。综上所述,银柴胡超临界萃取物为极性较低的复杂脂质成分,具有一定的自由基清除能力,其外用可对AD小鼠具有一定治疗作用,推测这种作用可能是通过调节血清IgE、IFN-γ及IL-4水平和降低皮肤中IL-4的水平来抑制HSD3B1的蛋白表达来发挥作用。
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