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第一部分长链非编码RNA MZF1-AS1与神经母细胞瘤进展密切相关目的:寻找与人神经母细胞瘤进展相关长链非编码RNA（lnc RNA）,评估其在神经母细胞瘤细胞系中的表达和定位,并阐明MZF1-AS1在神经母细胞瘤中的作用。方法:通过解析GEO公共数据库,寻找与人神经母细胞瘤患者临床指征相关的长链非编码RNA,并检测lnc RNA在神经母细胞瘤中的表达水平与生存的相关性。同时,应用实时定量PCR和Northern blot检测lnc RNA在各种神经母细胞瘤细胞系中的表达,以选择合适的细胞模型。此外,进行RNA FISH实验以了解lnc RNA在细胞中的定位。应用MTT、软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验以评估lnc RNA对神经母细胞瘤细胞增殖和侵袭的影响。此外,筛选lnc RNA过表达/敲低的神经母细胞瘤细胞系,建立裸鼠皮下肿瘤模型和尾静脉转移动物模型,评价lnc RNA对神经母细胞瘤增殖、侵袭和转移的影响。结果:通过解析GEO数据库,我们发现长链非编码RNA MZF1-AS1是与神经母细胞瘤进展密切相关的分子。实时定量PCR和Northern blot实验显示MZF1-AS1在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y相对低表达,而在IMR-32相对高表达。RNA FISH实验显示MZF1-AS1主要位于细胞核。随后的MTT、软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验结果表明,过表达MZF-AS1可促进神经母细胞瘤的增殖和侵袭,而敲低MZF-AS1则会抑制神经母细胞瘤的增殖和侵袭。此外,裸鼠皮下成瘤实验和尾静脉转移实验表明:与对照组相比,过表达MZF-AS1会促进肿瘤体积增大、质量增加和肿瘤转移,而敲低MZF-AS1将抑制肿瘤体积增大、质量增加和肿瘤转移。结论:长链非编码RNA MZF1-AS1是与神经母细胞瘤进展密切相关的分子,其可促进神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭和转移。第二部分长链非编码RNA MZF1-AS1与PARP1在神经母细胞瘤中相互作用目的:鉴定与MZF-AS1相互作用的蛋白,探讨MZF-AS1与相互作用蛋白的作用机制。方法:通过RNA pull-down实验及质谱鉴定与MZF-AS1相互作用蛋白。应用核酸与蛋白结合分析平台cat RAPID评估目标蛋白和MZF-AS1的结合能力。RIP、RNA EMSA以及In vitro binding实验用于进一步检测MZF-AS1与蛋白之间的相互作用,以及明确两者的互作区域。结果:RNA pull-down及质谱结果显示PARP1是与长链非编码MZF-AS1相互作用的蛋白。cat RAPID平台分析显示PARP1蛋白与MZF-AS1存在互作的可能,并解析了二者相互作用的结构基础。RIP实验进一步证实了两者间的相互作用。RNA EMSA实验结果表明MZF1-AS1的第6号外显子区域（第1240-1639bp）介导与PARP1结合。同时,利用PARP1重组蛋白进行In vitro binding实验结果显示,PARP1的BRCT结构域（第376-662位氨基酸）介导PARP1与MZF1-AS1相互作用。结论:长链非编码RNA MZF1-AS1与PARP1在神经母细胞瘤中相互作用。第三部分PARP1协同长链非编码RNA MZF1-AS1调控基因的表达目的:探讨PARP1对MZF1-AS1调控基因表达的作用。方法:通过RNA-seq确定长链非编码RNA MZF1-AS1调控的基因。采用综合蛋白互作数据库Bio GRID和基因表达调控软件Ch IP-X解析相应的转录因子及靶基因。应用双荧光素酶报告基因、Ch IP、实时定量PCR和western blot等实验以评估PARP1对MZF1-AS1靶基因表达的作用。结果:RNA-seq的结果显示MZF-AS1可调控基因的表达。Bio GRID和Ch IP-X分析结果表明,E2F1是调控MZF-AS1靶基因表达,且与PAPR1相互作用的最为重要的转录因子。双荧光素酶报告基因、Ch IP、实时定量PCR和western blot等实验显示,PARP1协同长链非编码RNA MZF1-AS1调控基因的表达。结论:PARP1协同长链非编码RNA MZF1-AS1调控基因的表达。第四部分长链非编码RNA MZF1-AS1促进PARP1和E2F1相互作用目的:阐明PARP1与E2F1相互作用机制以及对基因表达的影响,并探讨长链非编码MZF-AS1对二者相互作用的影响及机制。方法:采用免疫共沉淀和双分子荧光互补技术检测PARP1和E2F1相互作用。构建PARP1和E2F1的不同截短以研究二者相互作用的具体机制,并评估不同条件下的二者相互作用的变化。进行Ch IP、实时定量PCR和western blot实验以检测PARP1与E2F1相互作用对基因表达的影响。以软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验评估PARP1和E2F1对MZF1-AS1调控神经母细胞瘤细胞的影响。结果:免疫共沉淀和双分子荧光互补实验结果表明PARP1与E2F1在细胞内可直接相互作用。同时免疫共沉淀结果显示:PARP1的结构域BRCT和E2F1的结构域DNA结合区（DBD）介导二者间的相互作用。此外,过表或敲低MZF-AS1会影响PARP1与E2F1之间的相互作用,但不影响E2F1糖基化修饰水平。Ch IP、实时定量PCR和western blot实验表明PARP1与E2F1的相互作用可影响下游基因的表达。同时,软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验结果表明:PARP1与E2F1介导了MZF1-AS1对神经母细胞瘤细胞增殖和侵袭的影响。结论:长链非编码RNA MZF1-AS1可促进PARP1和E2F1相互作用。第五部分PIP-14抑制长链非编码RNA MZF1与PARP1的相互作用目的:探讨PIP-14对MZF1-AS1与PARP1相互作用的影响,评估PIP-14对神经母细胞瘤的作用。方法:运用蛋白和核酸互作位点分析平台RNABindRPlus解析介导PARP1与MZF1-AS1相互作用的氨基酸位点,并以RNA pull-down实验检测突变位点对PARP1与MZF1-AS1相互作用的影响。合成PARP1竞争肽PIP-14,以免疫荧光实验观察其摄取及细胞定位。通过RIP和RNA pull-down检测PIP-14对MZF1-AS1与PARP1相互作用的影响。同时,应用western blot检测PIP-14对下游靶基因表达的影响。采用软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验以检测PIP-14对神经母细胞瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。同时,建立稳定表达红色荧光蛋白的神经母细胞瘤细胞系,通过裸鼠皮下肿瘤模型和尾静脉转移模型,评估PIP-14对神经母细胞瘤增殖、侵袭和转移的影响。结果:RNABind RPlus解析表明PARP1结构域WGR中的三个氨基酸介导了PARP1与MZF-AS1相互作用。同时,RNA pull-down实验显示WGR中结合位点的突变抑制了核酸和蛋白相互作用。免疫荧光实验显示,合成肽PIP-14可被肿瘤细胞摄取,且其主要分布于细胞核内。RIP和RNA pull-down实验表明PIP-14可以抑制核酸-蛋白相互作用。并且,western blot实验证实PIP-14可抑制下游靶基因的表达。软琼脂克隆形成实验和基质胶侵袭实验显示:PIP-14可抑制神经母细胞瘤细胞增殖和侵袭。同时,裸鼠皮下成瘤实验和尾静脉转移实验表明:与对照组相比,PIP-14可抑制肿瘤体积增大、肿瘤质量增加和转移。结论:PIP-14可抑制MZF1-AS1与PARP1的相互作用,同时可抑制神经母细胞瘤的进展。第六部分神经母细胞瘤组织标本及细胞株中各基因表达分析目的:检测神经母细胞瘤组织标本及细胞株中基因表达,阐明其临床意义。方法:通过实时定量PCR与western blot检测不同神经母细胞瘤组织和细胞系中PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET的表达水平。解析GEO数据库以阐明PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET基因表达水平与生存的相关性。结果:实时定量PCR及western blot结果显示,不同神经母细胞瘤组织和细胞系中PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET的表达均高于正常组织。此外,Kaplan-Meier生存分析显示:高表达PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET组患者预后较低表达组差。结论:不同神经母细胞瘤组织和细胞系中PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET的表达均高于正常组织,并且高表达PARP1,E2F1,MZF1,c-Kit,PRKCG和RET的患者预后差。