【摘 要】
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目的:本研究通过研究过表达/敲低白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）对肝癌细胞生物学影响,在体内外探讨LIF表达水平对肝癌发生发展的作用。方法:1.构建LIF基因的载体,将慢病毒感染LIF过表达肝癌细胞株培养增殖,研究细胞功能试验,比如Transwell、CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验,裸鼠皮下移植瘤实验等,分别检测过表达LIF对肝癌细胞
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目的:本研究通过研究过表达/敲低白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）对肝癌细胞生物学影响,在体内外探讨LIF表达水平对肝癌发生发展的作用。方法:1.构建LIF基因的载体,将慢病毒感染LIF过表达肝癌细胞株培养增殖,研究细胞功能试验,比如Transwell、CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验,裸鼠皮下移植瘤实验等,分别检测过表达LIF对肝癌细胞生物学影响。2.通过Western blot、Real-Time PCR等方法验证肝癌中LIF基因过表达或者敲低效率。3.构建siRNA敲低LIF基因的肝癌细胞系,检测其对肝癌细胞生物学的影响。通过Transwell检测敲低LIF肝癌细胞株的增殖能力;4.通过Western Blot分别检测过表达LIF稳转肝癌细胞株、siRNA敲低LIF基因的肝癌细胞中PD-LI、MDM2、P21WAF1/CIP1等蛋白水平。结果:1.成功构建LIF过表达肝癌细胞株Huh7-LIF和Huh7-Ctrl;CCK8实验结果表明:实验组Huh7-LIF与对照组Huh7-Ctrl相比,细胞增殖速度明显下降;平板克隆实验表明了过表达LIF能够抑制肝癌细胞克隆形成;Transwell、细胞划痕的结果表明Huh7-LIF与对照组相比,细胞迁移速率明显下降;肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤实验结果显示:Huh7-LIF与对照组相比,瘤体的体积大小和重量明显减少。2.基因和蛋白水平表明LIF在肝癌细胞系中过表达和敲低成功。3.成功构建siRNA敲低LIF基因的肝癌细胞系;敲低LIF基因后,Transwell实验显示肝癌细胞迁移速度更快。4.过表达LIF肝癌细胞株后,PD-L1、MDM2的蛋白水平明显降低,P21WAF1/CIP1蛋白水平升高。然而,在敲低LIF基因后,肝癌细胞株中PD-L1、MDM2的蛋白水平明显升高,P21WAF1/CIP1蛋白水平明显降低。结论:1、过表达LIF能够降低肝癌细胞的增殖和迁移速率。2、LIF影响了 PD-L1表达,解除T细胞免疫检查点作用,发挥抗肿瘤作用,抑制肿瘤免疫逃逸。3、LIF通过MDM2、P21将细胞周期阻滞在G1期,发挥抑癌功能。
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