本试验通过转录组测序探究了副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）诱导猪腹膜间皮细胞（porcine peritoneal mesothelial cells,PPMC）损伤的相关分子机制,并研究了黄芩苷对GPS诱导PPMC细胞凋亡的影响及其对PKC-MAPK信号通路的干预作用。1.GPS感染PPMC的转录组测序分析。试验设空白对照组和GPS感染模型组,每组3个重复。根据本课题组前期研究,按照MOI为100:1加入GPS感染PPMC,共培养12 h后进行转录组测序,使用实时荧光定量PCR对所选取的12个差异基因进行了验证。结果表明,GPS感染PPMC后,表达差异显著基因有779个（P<0.05）,其中253个基因上调表达,526个基因下调表达;通过Q-RT PCR验证选取的12个基因中,10个基因表现出与RNA-seq数据一致的表达差异;并发现GPS感染PPMC后主要细胞炎性通路和MAPK通路都被激活,表现出细胞炎症反应,并影响细胞生长相关路径。2.黄芩苷对GPS感染PPMC后细胞凋亡的影响。共分为5个试验组,分别为空白对照组、107 CFU/m L GPS模型组、GPS+黄芩苷处理组（浓度分别为25、50和100μg/m L）。初始细胞为105个/m L,GPS所示浓度均为终浓度。细胞先加入药物预处理1h,再加入细菌共培养12 h。采用实时荧光定量PCR测定凋亡基因Bax、Bcl-xl和C-myc的mRNA表达量;采用Western blot法测定cleaved caspase-3蛋白表达量;采用流式细胞法检测细胞凋亡情况。实验结果表明:GPS侵染PPMC后,凋亡基因Bax、Bcl-xl和C-myc的m RNA表达量均出现极显著升高（P<0.01）,Cleaved Caspase-3蛋白表达量出现极显著升高（P<0.01）,细胞凋亡率极显著上升（P<0.01）;25μg/m L黄芩苷能显著下调基因Bax的表达量和降低细胞的凋亡率（P<0.05）;50μg/m L黄芩苷能极显著下调基因Bax的表达量（P<0.05）,极显著下调基因C-myc的表达量（P<0.01）,极显著降低cleaved caspase-3蛋白表达量（P<0.01）,显著降低受感染细胞的凋亡率（P<0.05）;100μg/m L黄芩苷能极显著下调Bcl-xl基因的表达量（P<0.01）,显著降低C-myc基因的表达量（P<0.05）,极显著降低cleaved caspase-3的蛋白表达量（P<0.01）和感染细胞的凋亡率（P<0.01）。3.黄芩苷对GPS感染PPMC后PKC-MAPK信号通路的影响。试验设置空白对照组、107 CFU/m L GPS模型组、GPS+黄芩苷处理组（浓度分别为25、50和100μg/m L）。初始细胞为105个/ml,GPS所示浓度均为终浓度。细胞先加入药物预处理1 h,再加入细菌共培养12 h。用Western blot法测定PKC-MAPK信号通路相关蛋白（PKC-α、p-PKC-α、PKC-δ、p-PKC-δ、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38、p-p38和cleaved caspase-3）的表达量;采用Q-RT PCR方法测定核转录因子AP-1（c-fos和c-jun）的m RNA表达水平。结果表明,PPMC被GPS侵染后,PKC-MAPK信号通路蛋白（p-PKC-α、p-PKC-δ、p-ERK、p-JNK和p-p38）的表达量和核转录因子AP-1（c-fos和c-jun）的m RNA表达水平均极显著上调（P<0.01）;50和100μg/m L黄芩苷能极显著下调PKC-MAPK信号通路蛋白（p-PKC-δ、p-p38、p-ERK和p-JNK）的表达水平和p-PKC-α通路蛋白的表达水平（P<0.01）;25μg/m L黄芩苷能极显著下调核转录因子AP-1（c-fos和c-jun）的基因表达量（P<0.01）;50μg/m L和100μg/m L黄芩苷能极显著下调核转录因子AP-1的基因表达量（P<0.01）。综上所述,GPS可诱导PPMC细胞凋亡,其机制可能与激活PKC-MAPK信号通路有关,黄芩苷可通过抑制PKC-MAPK信号通路的激活发挥抗凋亡作用。本研究为进一步阐明GPS的致病机理和黄芩苷防治副猪嗜血杆菌病的分子机理提供较好的研究基础。