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目的：建立体外血瘤屏障(Blood Tumor Barrier, BTB)模型,探索中药冰片开放血瘤屏障的分子机制。方法：1.分离鉴定培养脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVECs);2.大鼠胶质瘤细胞C6与第3代HUVECs非接触共培养建立体外血瘤屏障模型；3.免疫组织化学方法比较培养7-9天后的血瘤屏障模型上紧密连接蛋白claudin-5,和单独培养7-9天后的第3代HUVECs上紧密连接蛋白claudin-5表达的情况；透射电镜方法比较血瘤屏障模型上紧密连接和单独培养的第3代HUVECs上紧密连接的形成情况；4.用浓度为200μg/ml的冰片作用于体外血瘤脑屏障模型。分别在冰片作用2小时、4小时、8小时、16小时和24小时后,用免疫组织化学方法检测紧密连接蛋白claudin-5的表达情况,同时行透射电镜观察紧密连接的形态。结果：1.通过对人第Ⅷ因子相关抗原的检测,证明成功分离培养了脐静脉内皮细胞。2.成功建立体外血瘤屏障。3.体外血瘤屏障的检测如下：3.1免疫组织化学示：非接触共培养的体外血瘤屏障模型上紧密连接蛋白claudin-5的表达,较单独培养的HUVECs上claudin-5的表达明显上调(P<0.05)。3.2透射电镜示：非接触共培养的体外血瘤屏障模型上紧密连接,较单独培养的HUVECs上的紧密连接连续且紧密；经膜两面非接触共培养的C6细胞未伸出伪足包绕内皮细胞或突入内皮细胞间隙呈现典型的“血管周足”不完整现象。4.冰片作用体外血瘤屏障模型后：4.1免疫细胞化学示：冰片作用后的各组体外血瘤屏障模型上claudin-5的表达无明显差异(P>0.05)。4.2透射电镜示：冰片作用4小时后,发现血瘤屏障模型上紧密连接开始受到破坏,随着冰片作用时间的延长,16小时后破坏最为严重,但在24小时以后紧密连接的连续性恢复,变得更为紧密。结论：1.通过C6细胞与HUVECs非接触共培养,成功建立体外血瘤屏障模型。2.中药冰片通过影响紧密连接的形成来开放血瘤屏障,在本实验中,在作用4小时后,发现血瘤屏障模型上紧密连接开始受到破坏变得疏松而断续,作用16小时后破坏最为严重。24小时以后紧密连接连续性恢复,变得更为紧密。3.冰片开放血瘤屏障的机制不是通过调控内皮细胞上claudin-5的表达来实现的。