论文部分内容阅读
小花黄堇Corydalis racemosa（Thunb.）Pers.为罂粟科紫堇属一年生草本植物,别名黄堇、野水芹、黄花鱼灯草等,广泛分布于珠江流域和长江流域中、下游各省,其根或干燥全草入药,性寒,味苦涩,具有清热利湿,解毒杀虫的功效,临床常用于治疗湿热泄泻、痢疾、黄疸、目赤肿痛、聤耳流脓、疮毒、疥癣、毒蛇咬伤等。本文前期研究发现小花黄堇95%乙醇提取物能明显促进体外胰岛HIT-T15细胞分泌胰岛素,具有治疗糖尿病的潜力。进一步研究发现其二氯甲烷萃取部位和水部位是其促胰岛素分泌的活性部位。为阐明小花黄堇促胰岛素分泌的活性成分,本文对小花黄堇95%乙醇提取物的两个活性部位——二氯甲烷萃取部位和水部位进行了系统的化学成分研究,并对分离得到的单体化合物进行了促胰岛素分泌活性筛选。在此基础上,进一步研究了小花黄堇中主要化学成分的质谱裂解途径,并对小花黄堇95%乙醇提取物中的化学成分进行定性分析,取得了以下研究结果:1 文献综述本文对紫堇属药用植物的化学成分及药理活性进行了详细的归纳总结。文献调研发现,紫堇属植物主要含有生物碱类,此外还含有苯丙酰胺类、黄酮、萜类和甾体类、苯丙素类等化合物;药理活性主要包括抗炎、镇痛、抗癌、杀虫、胆碱酯酶抑制和保肝等。2 小花黄堇的化学成分研究采用多种色谱分离技术,结合各种波谱、光谱方法,对小花黄堇95%乙醇提取物中具有促胰岛素分泌活性的二氯甲烷萃取部位和水部位进行了系统地分离纯化,鉴定了57个单体化合物,包括17个生物碱:小花黄堇碱A（racemosine A,1）、小花黄堇碱B（racemosine B,2）、8-oxostylopine（8）、四氢黄连碱（stylopine,9）、hendersine B（10）、木兰箭毒碱（magnocurarine,11）、伪普罗托品（pseudoprotopine,12）、普罗托品（protopine,13）、唐松草酚定（thalifendine,14）、药根碱（jatrorrhizine,15）、青风藤碱（sinoacutine,16）、（-）-pallidine（17）、maclekarpine E（18）、木兰花碱（（+）-magnoflorine,19）、降氧化北美黄连次碱（noroxyhydrastinine,20）、pyrrolezanthine（21）、3-甲酰基吲哚indole-3-carbaldehyde,22);16个苯丙酰胺类化合物:N-顺式-芥子酰酪胺-4’-O-β-D-葡萄糖苷（N-cis-sinapoyltyramine-4’-O-β-D-glucoside,3）、N-顺式-芥子酰-3-甲氧基酪胺-4’-O-β-D-葡萄糖苷（N-cis-sinapoy-3-methoxytyramine-4’-O-β-D-glucoside,4）、N-反式-肉桂酰酪胺（N-trans-cmnamoyltyramine,23）、N-反式-阿魏酰苯乙胺（N-trans-feruloylphenethylamine,24）、N-反式-阿魏酰酪胺（N-trans-feruloyltyramine,25）、N-反式-阿魏酰-3-甲氧基酪胺（N-tras-feruloyl-3-methoxydopamine,26）、N-反式-芥子酰酪胺（N-trans-sinapoyltyramine,27）、N-反式-香豆酰酪胺（N-trans-p-coumaroyltyramine,28）、N-反式-o-甲氧基肉桂酰-3-羟基章鱼胺（N-trans-p-methoxycinnamoyl-3-hydoxyoctopamine,29）、N-反式-阿魏酰酪胺-4-O-β-D-葡萄糖苷（N-trans-feruloyltyramine-4-O-β-D-glucopyranoside,30）、N-反式-阿魏酰酪胺-4’-O-β-D-葡萄糖苷（N-trans-feruloytyramine-4’-O-β-D-glucopyranoside,31）、N-反式-芥子酰-7-羟基酪胺（N-trans-sinapoyl-7-hydroxytyramine,32）、N-顺式-芥子酰酪胺（N-cis-sinapoyltyramine,33）、N-顺式-阿魏酰-3-甲氧基酪（N-cis-feruloyl-3-methoxytyramine,34）、N-顺式-阿魏酰酪胺（N-cis-feruloyltyramine,35）、flavifloramide B（36）;12 个降碳倍半萜类化合物:3-羟基-4,7-巨豆二烯-9-酮-3-O-α-L-阿拉伯糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one-3-O-α-L-arabinopyranosyl-（1→）6）-β-D-glucopyranoside,5)、3-羟基-5α,6α-环氧-β-紫罗兰-3-O-β-D-木糖-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（3-hydroxy-5α,6α-epoxy-β-ionone-3-O-β-D-xylopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,6）、3-羟基-5α,6α-环氧-β-紫罗兰-3-O-α-L-阿拉伯糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（3-hydroxy-5α,6α-epoxy-β-ionone-3-O-α-L-arabinopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,7）、（+）-去氢催吐罗芙叶（（+）-dehydrovomifoliol,37）、3-羟基-4,7-巨豆二烯-9-酮（3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one,38）、9-羟基-4,7-巨豆二烯-3-酮（9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one,39）、6,9-二羟基-4,7-巨豆二烯-3-酮-9-O-β-D-葡萄糖苷（6,9-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one-9-O-β-D-glucoyranoside,40）、3-羟基-5α,6α-环氧-β-紫罗兰酮（3-hydroxy-5α,6α-epoxy-β-ionone,41）、icariside B2（42）、黑麦草内酯（loliolide,43）、5β,6α-二羟基-7-巨豆烯-9-酮-3β-O-β-D-葡萄糖苷（5β,6α-dihydroxy-7-megastigmen-9-one-3β-O-β-D-glucoyranoside,44）、crotolidine（45）;12 个其他类的化合物（包括7个黄酮苷类化合物,2个奎宁酸类化合物和3个小分子酚酸类化合物）:山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,46）、山柰酚-3-O-α-L-阿拉伯糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（kaempferol-3-O-α-L-arabinopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,47）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside-（1→2）-β-D-glucopyranoside,48）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（quercetin-3-O-α-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,49）、异鼠李素-3-β-D-木糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（isorhamnetin-3-O-β-D-xylopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,50）、槲皮素-3-O-β-D-木糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（quercetin-3-O-β-D-xylopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,51）、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（isorhamnetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside,52）、5-O-阿魏酰奎宁酸酯（5-O-feruloylquinic acid,53）、3-O-阿魏酰奎宁酸酯（3-O-feruloylquinic acid,54）、4-羟基-3-甲氧基-苯乙醇（4-hydroxy-3-methoxyphenylethanol,55）、香草醛（vanillin,56）、对羟基苯乙醇（p-hydroxyphenylethanol,57）。其中化合物1-7为新化合物,化合物3341为首次从紫堇属植物中分离得到,所有化合物均为首次从小花黄堇中分离得到。3单体化合物促胰岛素分泌活性评价在化学成分研究的基础上,采用胰岛HIT-T15细胞促胰岛素分泌筛选模型对所分离得到的13个单体化合物进行活性筛选。研究结果表明,化合物小花黄堇碱A（1）、小花黄堇碱 B（2）、伪普罗托品（12）、maclekarpine E（18）和 pyrrolezanthine（21）具有明显的促进HIT-T15细胞分泌胰岛素作用,且所有单体化合物在100μM浓度下未显示细胞毒性。4 小花黄堇中化学成分的定性分析采用LC-IT-TOF-MS技术对分离获得的单体化合物进行了质谱分析,初步阐明了其主要结构类型化合物质谱裂解规律。在此基础上,结合LC-IT-TOF-MS技术进一步通过质谱数据分析、对照品比对等方法对小花黄堇总提物中的化学成分进行了定性鉴别分析,共鉴定了 42个色谱峰。