绒泡菌目和发网菌目部分黏菌DNA分子系统学研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:feiniao6688
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黏菌是真核生物中一个特殊和重要的类群,含有萘醌类色素、生物碱、甾醇、不饱和酸等成分,具有抗细菌、抗肿瘤、细胞毒性等作用。由于其生活史表现出真菌特性与动物特性,黏菌究竟是真菌还是原生动物始终是生物分类学者热衷讨论的一个课题,也是黏菌系统发育研究中必须解决的关键问题。本研究通过对黏菌主要类群系统发育关系的探讨,为揭示黏菌的起源与演化提供理论依据。本研究通过对采自吉林省长春市周边、舒兰、磐石、桦甸、通化、集安、安图、敦化、长白山、陕西省秦岭山区及内蒙古海拉尔等地的基物进行湿室培养,共获得绒泡菌目和发网菌目2个目7种黏菌。采用湿室培养的方法,不仅补充了黏菌个体发育的研究资料,更为黏菌系统发育的研究及其资源的利用奠定了基础。本研究采用玻璃棒直接在离心管中研磨的CTAB法和Chelex-100法对黏菌的DNA进行了提取,经2%琼脂糖凝胶电泳检测,得到了良好的DNA条带,优化了黏菌DNA的提取工艺。这两种方法在获得高质量DNA的同时,提高了黏菌DNA提取的成功率,减少了黏菌材料消耗。因此,对于个体较小且资源有限的黏菌而言,采用玻棒研磨法和Chelex-100法是一种简便、有效的提取DNA方法。本文采用Clustal X 1.83 (Thompson et al.,1997)对NCBI上已注册的部分黏菌的相关基因序列片段进行比对(alignment),经BioEdit version 7.0.9.0 (Hall,T.A.,1999)人工调整后,运用分析软件MEGA4.0中基于缺失位点百分数(p-distance)的邻位相连法(Neighbor-Joining)构建系统发育树,同时进行2000次Bootstrap自举法检验。结果发现,ITS区段适用于黏菌种属界元的系统发育分析,12S和18S区段适用于属以上更高界元的系统发育分析。对系统发育树的结果分析可推断,无丝菌目黏菌与团毛菌目、发网菌目和绒泡菌目黏菌三个目的亲缘关系都较近。本研究首次对香蒲拟发网菌、亚丛拟发网菌及美发网菌进行了分子系统学方面的研究;对刺发网菌、亚从拟发网、美发网菌及香蒲拟发网菌进行ITS区扩增及序列测定;对香蒲拟发网菌和粉红双皮菌12S区扩增及序列测定,将香蒲拟发网菌12S区扩增序列在GeneBank上进行了序列测定,登录号为HM102318;对香蒲拟发网菌和粉红双皮菌18S区扩增及序列测定。基于分子特征构建了系统树,讨论了系统发育关系。
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