【摘 要】
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目的运用基因重组技术，构建pcD NA3.1（+）-SAA真核表达载体并将此重组载体转染人鼻咽癌CNE2细胞，检测该重组载体在人鼻咽癌CNE2细胞中的表达，探讨SAA基因高表达对人鼻咽癌CNE2细胞
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目的运用基因重组技术，构建pcD NA3.1（+）-SAA真核表达载体并将此重组载体转染人鼻咽癌CNE2细胞，检测该重组载体在人鼻咽癌CNE2细胞中的表达，探讨SAA基因高表达对人鼻咽癌CNE2细胞生长增殖的影响，为研究SAA基因在鼻咽癌发生发展中的作用机制提供新的实验依据。方法以人鼻咽癌CNE2细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA蛋白编码区CDS片段，经酶切纯化后与pcD N A3.1（+）连接；并对重组载体进行测序及Blast比对分析；随后将重组载体用脂质体LipofectamineTM2000转染人鼻咽癌CNE2细胞，采用Western bloting检测转染前后人鼻咽癌CNE2细胞中SAA蛋白的表达，并用MTT法检测SAA蛋白对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响。结果：1、pcD N A3.1（+）-SAA经酶切、测序鉴定及Blast比对分析，真核表达载体构建成功；2、Western blot实验结果显示，转染pcD N A3.1（+）-SAA真核表达载体后人鼻咽癌CNE2细胞中SAA蛋白表达水平明显高与未转染组及转染空载体pcD N A3.1（+）组，统计分析差异具有显著性意义（P＜0.05）；3、MTT实验发现，从转染24小时起，转染pcD N A3.1（+）-SAA真核表达载体的CNE2细胞生长速度明显快于未转染组及转染空载体pcD N A3.1（+）组，统计分析差异具有显著性（P＜0.05）。结论1、pcD N A3.1（+）-SAA真核表达载体成功在鼻咽癌CNE2细胞中表达；2、淀粉样蛋白A（SAA）能促进鼻咽癌CNE2细胞生长增殖。
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