共相关蛋白ANXA7/Gal-3/SRI在小鼠肝癌细胞中的表达及对细胞生物学行为的影响

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目的:为了深入揭示肝癌淋巴道转移的分子机制,研究膜联蛋白A7(annexin A7,ANXA7)及其共相关蛋白半乳糖凝集素3(galectin-3,Gal-3)、抗药蛋白(sorcin,SRI)在小鼠肝癌高、低淋巴道转移潜能Hca-F/Hca-P细胞中的表达差异、细胞内定位及对小鼠肝癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR技术,检测ANXA7/Gal-3/SRI在Hca-F/Hca-P细胞中基因水平的表达;采用Western blot技术,检测ANXA7/Gal-3/SRI在Hca-F/Hca-P细胞株中蛋白水平的表达;采用CCK-8方法,检测肿瘤细胞的增殖能力;Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力;采用免疫荧光方法,检测蛋白在细胞内的定位情况。结果:ANXA7在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的3.13倍和1.31倍;半乳糖凝集素3在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.56倍和1.35倍;SRI在Hca-F细胞中的基因水平和蛋白水平表达分别为Hca-P细胞的1.5倍和1.8倍。ANXA7有51KD和47KD两个亚型,47KD表达高于51KD:OD值之比约为45±5比174±12。Hca-F细胞在体外的增殖、迁徙、侵袭能力均高于Hca-P细胞。免疫荧光结果表明,ANXA7及其共相关蛋白Gal-3、SRI都主要在细胞浆表达。结论:ANXA7及其共相关蛋白Gal-3、SRI在基因及蛋白水平的表达高低情况与细胞体外增殖、迁徙、侵袭能力正相关,它们可能在小鼠肝癌体外增殖、迁徙侵袭及肿瘤淋巴道转移中共同发挥重要作用,这为进一步探讨其作用机制和功能奠定了基础。目的:为了深入揭示肝癌淋巴道转移的分子机制,研究ANXA7下调表达后,其共相关蛋白Gal-3在小鼠肝癌细胞中的表达及其对体外增殖、迁移和侵袭能力等生物学行为的影响。方法:采用qRT-PCR技术,检测ANXA7和Gal-3在Hca-P/PANXA7-control/PANXA7-down细胞中基因水平的表达情况;采用western blot技术,检测ANXA7和Gal-3在Hca-P/PANXA7-control/PANXA7-down细胞株中蛋白水平的表达情况;采用CCK-8方法,检测肿瘤细胞的增殖能力;采用Transwell小室方法,检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力;采用免疫荧光方法,检测两蛋白在细胞内的定位;采用IPA及metacore(genego)等生物信息学分析软件,分析ANXA7和Gal-3相互作用及通路上下游关系。结果:在Hca-P细胞中,Annexin A7基因下调后,galectin-3在蛋白水平和基因水平均下降,细胞增殖、迁徙和侵袭能力明显降低;免疫荧光结果表明,ANXA7及Gal-3都在Hca-P细胞浆内表达,显示两种蛋白相互共定位;IPA和metacore(genego)生物信息学软件分析表明,ANXA7和Gal-3在DNA damage network and cellproliferation cycle checkpoint arrest pathway通路中发挥作用。结论:ANXA7和Gal-3为共相关蛋白,两者相互作用及表达调控可能在小鼠肝癌体外增殖、迁徙侵袭及肿瘤淋巴道转移中发挥重要作用。
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