磺胺甲噁唑单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立

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磺胺类药物是预防和治疗细菌感染性疾病的重要药物,经常作为饲料添加剂使用,是动物源性食品中常见的药物残留之一,磺胺类药物残留能引起人的中毒或过敏性反应,并被怀疑有致癌性。作为一种重要的磺胺类药物,磺胺甲噁唑在磺胺类药物的使用中占有很大比例。因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺甲噁唑残留检测方法,对于动物源性食品的安全检测具有实际意义。 本研究在分析磺胺甲噁唑免疫学特性的基础上,运用单克隆抗体技术制备其单抗,并组装了竞争ELISA试剂盒和胶体金试纸。主要研究结果如下: 1. 磺胺甲噁唑人工抗原的制备与鉴定 采用重氮化方法将磺胺甲噁唑(SMZ)偶联于载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原BSA-SMZ 和包被原OVA-SMZ,并利用紫外扫描(UV)和SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定,紫外扫描图谱显示合成的人工抗原的最大吸收峰发生偏移,并有-N=N-特征吸收峰出现,证明偶联成功,SDS-PAGE结果表明BSA的泳动速度大于BSA-SMZ,说明BSA-SMZ的分子量大于BSA,进一步说明SMZ与BSA偶联成功。 2. SMZ单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定 用BSA-SMZ免疫Balb/C小鼠4只,血清效价检测后选出细胞融合小鼠1只,将免疫小鼠脾细胞与NS0瘤细胞进行细胞融合,运用杂交瘤技术建立了分泌SMZ单克隆抗体(McAb)的细胞株。经检测、筛选、克隆化后,获得3G6、2C10、2F1三株特异敏感的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法制备SMZ McAb,经鉴定其中亲和力较好的3G6对SMZ的IC50为12.40μg/L,与磺胺嘧啶的交叉反应率为2.84%,与其他同类磺胺类药物无交叉反应。本实验制备的SMZ McAb可用于SMZ残留检测的免疫学试验。 3. 磺胺甲噁唑残留快速检测方法的建立 应用酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析试验(GICA)原理,分别组装了SMZ残留快速检测竞争ELISA试剂盒和快速检测免疫金标试纸(SMZ-Strip)。SMZ-Kit的标准曲线呈S型,线性检测范围为1.0~128.0μg/L,并用于检测尿液中磺胺甲噁唑的残留,试剂盒进行猪尿中的磺胺甲噁唑残留检测可以在一个小时内完成,试纸条则可以在8到10分钟内完成。两种产品均具有快速、敏感、特异、简便等特点,可以广泛的用于对磺胺甲噁唑残留的定性、半定量和定量检测。
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