评价亚油酸对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞炎症因子释放的影响。
方法提取C57BL/C小鼠巨噬细胞后，接种于24孔板(4×105个/孔)和6孔板(2×106个/孔)中，于5% CO2、饱和湿度为37 ℃细胞培养箱中贴壁过夜。实验Ⅰ：取24孔板中的细胞，采用随机数字表法分为5组(n＝8)：对照组(C组)、LPS组和不同浓度亚油酸组(LA1-3组)。LPS组加入无菌无水乙醇1 μl；LA1-3组分别加入0.1、0.5和1.0 mol/ml亚油酸1 μl；30 min后LPS组和LA1-3组分别加入100 μg/ml LPS 1 μl。于给予LPS后6 h时收集细胞培养液，采用ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6的浓度。实验Ⅱ：取6孔板中的细胞，采用随机数字表法分为3组(n＝6)：对照组(C组)、LPS组和0.5 mol/ml亚油酸组(LA组)。LPS组加入无菌无水乙醇1 μl; LA组加入0.5 mol/ml亚油酸1 μl；30 min后LPS组和LA组分别加入100 μg/ml LPS 1 μl。于给予LPS后1 h时，采用流式细胞术测定Toll样受体4(TLR4)的表达水平，采用Western blot法测定磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)的表达水平。
结果实验Ⅰ与C组比较，LPS组、LA1组、LA2组和LA3组细胞上清液TNF-α和IL-6的浓度升高(P<0.05)；与LPS组比较，LA1组、LA2组和LA3组细胞上清液TNF-α和IL-6的浓度降低(P<0.05)；与LA1组比较，LA2组和LA3组细胞上清液TNF-α和IL-6的浓度降低(P<0.05)；与LA2组比较，LA3组细胞上清液TNF-α和IL-6的浓度降低(P<0.05)。实验Ⅱ 与C组比较，LPS组和LA组巨噬细胞TLR4、p-NF-κB p65、p-ERK及p-p38 MAPK的表达上调(P<0.05)；与LPS组比较，LA组巨噬细胞TLR4、p-NF-κB p65、p-ERK和p-p38 MAPK的表达下调(P<0.05)。
结论亚油酸可抑制LPS诱发小鼠巨噬细胞炎症因子的释放，其机制可能与抑制TLR4信号通路的激活有关。