【摘 要】
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文中旨在以N-糖基化位点突变的重组热休克蛋白gp96为对象,研究N-糖基化修饰对其免疫功能的影响.首先利用昆虫表达系统表达野生型和突变型gp96蛋白,并检测其糖基化水平.进一步通过体外和体内实验,利用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠CD8+IFN-γ+T细胞亚群和IFN-γ的分泌,查明糖基化对gp96抗原呈递功能的影响,进一步用ATPase试剂盒检测gp96的ATPase活性.最后通过小鼠免疫实验探究糖基化对gp96疫苗
【机 构】
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中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室,北京 100101;中国科学院大学,北京 100049;北京热休生物技术有限公司,北京 100123;北京康明海慧生物科技有限公司,北京
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文中旨在以N-糖基化位点突变的重组热休克蛋白gp96为对象,研究N-糖基化修饰对其免疫功能的影响.首先利用昆虫表达系统表达野生型和突变型gp96蛋白,并检测其糖基化水平.进一步通过体外和体内实验,利用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠CD8+IFN-γ+T细胞亚群和IFN-γ的分泌,查明糖基化对gp96抗原呈递功能的影响,进一步用ATPase试剂盒检测gp96的ATPase活性.最后通过小鼠免疫实验探究糖基化对gp96疫苗佐剂功能和活化流感疫苗特异性T细胞的影响.结果 显示,N-糖基化修饰位点突变后,重组gp96蛋白总合糖量下降了27.8％.与野生型重组蛋白相比,突变gp96的抗原呈递能力减弱,同时ATPase活性明显降低.同时与野生型重组gp96相比,突变gp96佐剂活化流感疫苗特异性T细胞水平也明显减少.这些结果表明,N-糖基化修饰参与调节gp96的ATPase活性和抗原呈递功能,进而影响其疫苗佐剂功能,为开发基于gp96的佐剂疫苗提供了依据.
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