【摘 要】
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表达纯化新型冠状病毒核衣壳(N)蛋白不同片段,建立新冠病毒总抗体荧光免疫层析方法并评价不同蛋白片段对该方法的影响.利用生物信息学技术对N蛋白序列进行分析、合成及原核表达、纯化,制备不同N蛋白片段;采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC)法荧光微球偶联抗原建立夹心荧光层析抗体检测方法,并分别进行性能评价.在制备的4个N蛋白片段中优选出全长N蛋白(N419)包被,N412加入
【机 构】
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河南中医药大学第二临床医学院,河南郑州 450000;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州 450000;郑州职业技术学院,河南郑州 450010;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州 450000;
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表达纯化新型冠状病毒核衣壳(N)蛋白不同片段,建立新冠病毒总抗体荧光免疫层析方法并评价不同蛋白片段对该方法的影响.利用生物信息学技术对N蛋白序列进行分析、合成及原核表达、纯化,制备不同N蛋白片段;采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC)法荧光微球偶联抗原建立夹心荧光层析抗体检测方法,并分别进行性能评价.在制备的4个N蛋白片段中优选出全长N蛋白(N419)包被,N412加入0.5 mol/L NaC1进行标记作为最优组合;删掉N抗原N端第91-120位氨基酸(N412)可减少87.5％的非特异性干扰;线性范围为0.312-80 U/L,最低检出限为0.165 U/L,准确度在95％以上.优选配对N蛋白片段建立的新冠病毒总抗体荧光免疫层析检测方法,与广州万孚试纸条对比总符合率为98％,有望用于新型冠状病毒的辅助检测,同时为新冠抗体检测试剂性能的提升提供实验依据和借鉴.
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