【摘 要】
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目的 克隆人胰腺癌相关易感基因HNF1α,并通过检测三种不同胰腺癌细胞系中HNF1α的表达,筛选出HNF1α低表达的胰腺癌细胞系,为进一步研究提供依据.方法 提取BxPC-3,PANC-1及S
【机 构】
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中山大学附属第七医院检验科,广东深圳,518017;中山大学孙逸仙纪念医院胆胰外科,广东广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院检验科,广东广州,510120
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目的 克隆人胰腺癌相关易感基因HNF1α,并通过检测三种不同胰腺癌细胞系中HNF1α的表达,筛选出HNF1α低表达的胰腺癌细胞系,为进一步研究提供依据.方法 提取BxPC-3,PANC-1及SW-1990胰腺癌细胞系的总RNA,用RT-PCR方法扩增HNF1α基因,PCR产物及pcDNA3.1(+)经EcoR I/XhoI双酶切后,用T4 DNA连接酶连接,连接产物转化细菌后挑选克隆,进行测序鉴定.通过Real-time PCR及Western blot方法比较HNF1αmRNA及蛋白在不同胰腺癌细胞系中的表达量.结果 克隆得到了1914 bp的HNF1α基因cDNA序列,与已发表的HNF1α同源性为99％.BxPC-3,PANC-1及SW-1990细胞HNF1αmRNA相对表达量分别为(6.52±1.11),(3.09±0.54)及1,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot法检测HNF1α蛋白表达水平显示,在SW-1990细胞中HNF1α蛋白有少量表达,而在PANC-1,BxPC-3细胞系中HNF1α蛋白表达依次增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HNF1α表达水平与胰腺癌细胞分化程度呈明显正相关,HNF1αmRNA及蛋白在SW-1990细胞系中均呈低表达,因此该细胞系可作为良好的研究工具,为进一步将HNF1α转染该细胞系,以研究HNF1α对胰腺癌的抑癌作用提供依据.
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