【摘 要】
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目的探讨在悬浮MDCK细胞中培养H7N9禽流感病毒时最佳的TPCK胰酶添加量。方法在细胞生长期和产毒期，添加不同浓度的TPCK胰酶，每12 h取样监测其对细胞生长的数量、活率、葡萄糖和乳酸的代谢以及血凝滴度的影响，并对TPCK胰酶的批间差异做一探索。细胞生长期胰酶的添加量为0、1、2、4、6、8、10、15 μg/ml；产毒期胰酶的添加量为0、0.5、1、1.5、2、2.5 μg/ml。出现血凝滴
【机 构】
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国家联合疫苗工程技术研究中心，武汉 430207；武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室 430207,国家联合疫苗工程技术研究中心，武汉 430207；武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性
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目的探讨在悬浮MDCK细胞中培养H7N9禽流感病毒时最佳的TPCK胰酶添加量。
方法在细胞生长期和产毒期，添加不同浓度的TPCK胰酶，每12 h取样监测其对细胞生长的数量、活率、葡萄糖和乳酸的代谢以及血凝滴度的影响，并对TPCK胰酶的批间差异做一探索。细胞生长期胰酶的添加量为0、1、2、4、6、8、10、15 μg/ml；产毒期胰酶的添加量为0、0.5、1、1.5、2、2.5 μg/ml。出现血凝滴度同等情况时，以MOI为0.001、0.005、0.025、0.05再次进行优化。
结果未见TPCK胰酶浓度对细胞数量、活率、葡萄糖和乳酸代谢明显的线性影响；在TPCK胰酶浓度高达15 μg/ml时，也未见其对细胞生长的毒性。接种H7N9禽流感病毒后，1、1.5、2、2.5 μg/ml的胰酶添加在48 h都达到了最高的滴度，为1∶26.5，在60 h，后两种添加浓度的血凝滴度下降快于前两种添加浓度； MOI为0.005时，1.5 μg/ml的胰酶添加在48 h产生的血凝滴度26.5高于同等条件下1 μg/ml的26的血凝滴度。在TPCK胰酶不同批次中，有批间差异的存在。
结论1 μg/ml和1.5 μg/ml的胰酶添加可更好地促进H7N9禽流感病毒增殖，但1.5 μg/ml的添加有更广谱的MOI适用性。
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