【摘 要】
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目的：探究四神丸含药血清对人结肠癌细胞HCT116有氧糖酵解的影响和作用机制。方法：采用细胞增殖与活性检测-8（CCK8）法检测不同浓度四神丸含药血清（2.5%、5%、10%）处理结肠癌HCT116细胞24h、48h、72h后的细胞活力；微量法检测细胞培养液中乳酸浓度和细胞内葡萄糖含量，以及己糖激酶（HK）和果糖-6-磷酸激酶（PFK）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-timePCR）
【机 构】
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成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目（82204951）； 四川省科技厅（2020JDRC0102）； 四川省中医药重点学科建设项目-中医肿瘤病学（2100601）；
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目的：探究四神丸含药血清对人结肠癌细胞HCT116有氧糖酵解的影响和作用机制。方法：采用细胞增殖与活性检测-8（CCK8）法检测不同浓度四神丸含药血清（2.5%、5%、10%）处理结肠癌HCT116细胞24h、48h、72h后的细胞活力；微量法检测细胞培养液中乳酸浓度和细胞内葡萄糖含量，以及己糖激酶（HK）和果糖-6-磷酸激酶（PFK）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-timePCR）检测葡萄糖转运酶1（GLUT1）mRNA含量；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测GLUT1、甲基转移酶样3（METTL3）蛋白表达；免疫荧光染色法检测细胞GLUT1表达；比色法检测N6-甲基腺苷(m6A)RNA甲基化水平。结果：与空白组相比，2.5%、5%、10%四神丸含药血清24h对HCT116细胞活力均无明显影响，10%四神丸含药血清在48h可显著抑制HCT116细胞活力（P＜0.05），故后续实验选用10%四神丸含药血清，给药时间为48h。与空白组相比，10%四神丸含药血清能够降低乳酸生成（P＜0.05），并下调细胞对葡萄糖摄取（P＜0.05），并降低糖酵解关键限速酶HK和PFK的活性（P＜0.05），同时四神丸含药血清还可降低GLUT1蛋白（P＜0.01）及其mRNA表达（P＜0.05），并减少表达GLUT1的细胞比例（P＜0.01）。与空白组相比，四神丸含药血清还能降低METTL3蛋白含量（P＜0.05）以及m6ARNA甲基化水平（P＜0.01）。结论：四神丸能够抑制结肠癌细胞糖酵解，其作用机制可能与降低METTL3过表达，抑制m6ARNA甲基化，下调GLUT1 及细胞内HK、PFK等有氧糖酵解相关酶的活性有关。
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