【摘 要】
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目的 利用不同型别流行性感冒病毒（influenzavirus，简称流感病毒）共感染细胞可发生基因组重配，用H1N1（IVR180）和H5N1（NIBRG-14）流感病毒疫苗株在犬肾细胞（Madin-Darbycaninekidneycells，MDCK细胞）上自然重配，以筛选获得适用于MDCK细胞生长的新型H1N1流感疫苗株。方法将甲型流感病毒株H1N1（IVR180）与能在MDCK细胞上复制并
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室国家联合疫苗工程技术研究中心
【基金项目】
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科技重大专项（2016ZX09106003-008）；
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目的 利用不同型别流行性感冒病毒（influenzavirus，简称流感病毒）共感染细胞可发生基因组重配，用H1N1（IVR180）和H5N1（NIBRG-14）流感病毒疫苗株在犬肾细胞（Madin-Darbycaninekidneycells，MDCK细胞）上自然重配，以筛选获得适用于MDCK细胞生长的新型H1N1流感疫苗株。方法将甲型流感病毒株H1N1（IVR180）与能在MDCK细胞上复制并表现出高滴度的H5N1（NIBRG-14）毒株共感染MDCK细胞，向有共感染细胞的培养液中添加H5N1抗血清进行压力筛选以降低亲本H5N1流感毒株，使用蚀斑筛选单克隆毒株后，通过反转录聚合酶链反应（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）进行重配毒株的筛选鉴定，并对毒株的序列、毒力、免疫原性及遗传稳定性进行了评价。结果 H1N1和H5N1重配毒株rH1-C7经过RT-PCR及基因测序证明其HA、NA、NS、M、NP与IVR180毒株同源性为100%，PA、PB1、PB2基因与NIBRG-14株同源性为100%；rH1-C7感染MDCK细胞后，血凝滴度达到1024；毒株灭活后接种小鼠，小鼠产生了能够中和H1N1（IVR180）毒株的特异性抗体，且血清效价高于亲本IVR180疫苗株。结论通过基因重配获得了适应于在MDCK细胞上增殖的新型H1N1流感病毒疫苗株，且疫苗株灭活后具有较高的免疫原性，为MDCK细胞基质流感病毒疫苗株的制备奠定了基础。
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