【摘 要】
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本试验基于尿嘧啶糖基化酶(UNG)能特异地识别并切割DNA分子中出现的尿嘧啶核苷的原理,以构建一种防污染的食源性沙门菌(Salmonella)PCR检测方法.经过酶量、抑制剂(UGI)用量、反应时间的优化,最终确立的防污染条件为:在PCR反应前,扩增体系所用的dNTP中以3倍浓度的dUTP代替dTTP;在阳性对照的反应体系中加入1.5U UNG、2U UGI以及含有尿嘧啶的DNA(U-DNA)阳性模板;其他检测样品的反应体系中加入1.5U UNG;50℃保温10 min,再25℃保温15 min,然后进行
【机 构】
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成都农业科技职业学院,四川成都611130;西南民族大学畜牧兽医学院,四川成都610041
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本试验基于尿嘧啶糖基化酶(UNG)能特异地识别并切割DNA分子中出现的尿嘧啶核苷的原理,以构建一种防污染的食源性沙门菌(Salmonella)PCR检测方法.经过酶量、抑制剂(UGI)用量、反应时间的优化,最终确立的防污染条件为:在PCR反应前,扩增体系所用的dNTP中以3倍浓度的dUTP代替dTTP;在阳性对照的反应体系中加入1.5U UNG、2U UGI以及含有尿嘧啶的DNA(U-DNA)阳性模板;其他检测样品的反应体系中加入1.5U UNG;50℃保温10 min,再25℃保温15 min,然后进行常规的PCR扩增.结果显示,即使在高浓度U-DNA污染的反应体系里(所有PCR扩增产物均为含有尿嘧啶的U-DNA),UNG也可有效地消除污染,且对PCR的特异性和敏感性无影响.因此,本试验建立的防污染PCR检测方法高效快速,操作简便,对提高食源性沙门菌检测的准确性以及防止假阳性的出现具有实际意义.
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