评价M₃受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用。

正常人肺微血管内皮细胞和M₃ shRNA转染人肺微血管内皮细胞，以1×10⁵个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中，采用随机数字表法分为5组(n＝5)：对照组(C组)、LPS组、PHC＋LPS组(P＋LPS组)、LPS＋M₃ shRNA转染组(LPS＋shRNA组)和PHC＋LPS＋M₃ shRNA转染组(P＋LPS＋shRNA组)。C组不给予药物处理；余各组均加入终浓度为0.1 μg/ml LPS；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2 μg/ml；LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M₃受体shRNA的质粒转染细胞。加入LPS后1 h时，采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量；免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达；Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达；ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量；实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M₃受体mRNA表达水平。

与C组比较，LPS组和P＋LPS组F-actin含量降低，VE-cadherin和IκB表达下调，TNF-α和IL-6含量升高，MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05)；与C组比较，LPS组M₃受体mRNA表达上调(P<0.05)，P＋LPS组差异无统计学意义(P>0.05)；与LPS组比较，P＋LPS组和LPS＋shRNA组F-actin含量升高，VE-cadherin和IκB表达上调，TNF-α和IL-6浓度降低，MLCK、NF-κB p65和M₃受体mRNA表达下调(P<0.05)；与P＋LPS组比较，P＋LPS＋shRNA组F-actin含量升高，VE-cadherin和IκB表达上调，TNF-α和IL-6浓度降低，MLCK、NF-κB p65和M₃受体mRNA表达下调(P<0.05)。

PHC可通过干扰M₃受体，抑制NF-κB介导炎性反应，减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤。