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利用自组装技术和静电吸附作用,将带正电荷的纳米金(nano-Au⊕)和带负电荷的血红蛋白(Hb)层层自组装于L-半胱胺酸(L-cys)修饰的金电极表面,从而制得用于检测过氧化氢(H2O2)的无电子媒介体的第三代电流型生物传感器({Hb/nano-Au⊕}5/L-cys/gold).通过电子显微镜技术和微量电泳技术考察了不同粒径正电荷的纳米金的相关特征;通过交流阻抗技术、原子力显微镜技术、循环伏安法和计时电流法考察了电极表面的电化学特性,并对该传感器的作用机理及性能进行了详细的研究.用计时电流法测得H2O2的线性范围为2.1×10?8~1.2×10?3mol/L(r=0.994),检出限为1.1×10?8mol/L,米氏常数(kmapp)为0.10mmol/L.实验结果表明,该方法与单层带正电的纳米金固载血红蛋白及带负电的纳米金层层自组装固载血红蛋白相比,显著提高了血红蛋白的固定量,并能保持血红蛋白的生物活性,从而增强了传感器的灵敏度和稳定性,拓宽了线性响应范围及降低了检测下限.