探讨陷窝蛋白1在尖锐湿疣角质形成细胞中的表达及其与角质形成细胞增殖和凋亡的相关性。
方法免疫组化En Vision法和TUNEL技术检测40例尖锐湿疣皮损组织和10例健康人包皮组织中角质形成细胞陷窝蛋白1、增殖细胞核抗原的表达和细胞凋亡，计算陷窝蛋白1平均吸光度、增殖指数和凋亡指数，比较两组之间的差异，并分析尖锐湿疣组中陷窝蛋白1表达与增殖指数、凋亡指数的相关性。针对陷窝蛋白1基因设计3条siRNA，用脂质体转染法将siRNA导入HaCaT细胞，用荧光定量PCR方法筛选出干扰效果最佳的siRNA，转染HaCaT细胞为实验组，转染非特异序列的细胞为阴性对照组，未转染的细胞为空白对照组。Western印迹和免疫荧光检测转染48 h后陷窝蛋白1的表达水平；MTS法分别测定干扰陷窝蛋白1基因24、48、72 h后HaCaT细胞增殖的变化；流式细胞仪(FCM)检测干扰陷窝蛋白1基因48 h后HaCaT细胞的凋亡情况。
结果尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1的表达(0.042±0.021)显著低于正常包皮组织(0.181±0.075)，差异有统计学意义(t= 5.843, P < 0.001)。尖锐湿疣皮损中角质形成细胞的增殖指数(65.63%±19.86%)和凋亡指数(24.12%±10.86%)均显著高于正常包皮组织(23.51%±4.00%，3.13%±1.12%)，两组差异有统计学意义(t= 12.440、11.970，均P < 0.001)。尖锐湿疣组陷窝蛋白1表达与增殖指数呈显著负相关(r=-0.798, P < 0.05)，与凋亡指数呈显著正相关(r= 0.825, P < 0.05)。荧光定量PCR显示siRNA-2在浓度25 nmol/L下抑制效果最佳。Western印迹和免疫荧光显示，转染siRNA 48 h后，实验组陷窝蛋白1的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P < 0.05)。MTS结果显示，实验组细胞24、48和72 h时的A值分别为0.563±0.013、0.628±0.006和0.811±0.018，高于空白对照组(0.541±0.009、0.575±0.012和0.722±0.004)和阴性对照组(0.536±0.006、0.571±0.015和0.719±0.002)，差异有统计学意义(均P < 0.05)，空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P > 0.05)。实验组HaCaT细胞凋亡率为(8.90%±0.06%)，低于空白对照组(20.59%±0.87%)和阴性对照组(20.64%±0.09%)，差异有统计学意义(均P < 0.05)，空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P > 0.05)。
结论尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1表达下降，可能与角质形成细胞增殖加快、细胞凋亡减少有关。