【摘 要】
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目的 采用胰蛋白酶+I型胶原酶预消化后连续组织块法进行SD大鼠脂肪来源干细胞的体外培养,并和Zuk的胶原酶消化法培养效果相比较,为脂肪来源干细胞的体外培养方法提供参考依据
【机 构】
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复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);上海市卫生局资助项目;复旦青年骨干基金
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目的 采用胰蛋白酶+I型胶原酶预消化后连续组织块法进行SD大鼠脂肪来源干细胞的体外培养,并和Zuk的胶原酶消化法培养效果相比较,为脂肪来源干细胞的体外培养方法提供参考依据.方法 取1月龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,分A、B两组.A组使用D-Hanks液冲洗净后剪成8mm3左右组织块.0.25%胰蛋白酶消化5min后,0.1%I型胶原酶消化组织块20min,将组织块置于孔径1mm的尼龙网放至培养皿贴壁培养,3-4d后将组织块连同滤网放至下一培养皿中以连续组织块法培养3-4次.B组使用Zuk的胶原酶消化法培养.采用MTT检测方法对细胞增殖活性进行比较,流式细胞仪检测脂肪干细胞表面标志.结果 A、B两组培养的细胞均具有典型的干细胞形态特征,生长曲线相似,脂肪干细胞标志CD105、CD44呈阳性表达.结论 采用酶预消化连续组织块法可以进行脂肪来源干细胞的培养,并且能在短时间内获得多个脂肪干细胞样本,具有一定的应用价值.
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