【摘 要】
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目的 探讨益肺活血方对香烟提取物诱导巨噬细胞炎症反应的影响.方法 用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇将U937细胞诱导为巨噬细胞, 用1.2、2.4、4.8、9.6 g/L的益肺活血方及5、10、2
【机 构】
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南方医科大学第三临床医学院 广东 510515南方医科大学第三临床医学院 广东 510515;海军总医院干部呼吸科;
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目的 探讨益肺活血方对香烟提取物诱导巨噬细胞炎症反应的影响.方法 用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇将U937细胞诱导为巨噬细胞, 用1.2、2.4、4.8、9.6 g/L的益肺活血方及5、10、20、50、100 mL/L的香烟提取物处理巨噬细胞,于12、24、48 h用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法测定细胞活性.巨噬细胞分5组:正常细胞组、香烟提取物组、香烟提取物+益肺活血方低、中、高浓度组,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养上清白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,RT-PCR法检测胞内IL-8 和TNF-α mRNA水平.机制实验分4组:正常细胞组、香烟提取物组、香烟提取物+益肺活血方(2.4 g/L)组及香烟提取物+NF-κB抑制剂组,蛋白印迹法(Western blot)检测胞内核转录因子-κB(NF-κB) p50、p65及p-IκB表达;免疫荧光法观察胞核内NF-κB p65及胞浆内p-IκB表达.结果 益肺活血方(9.6 g/L)作用细胞24、48 h后 及香烟提取物(100 mL/L)于各时间点均有细胞毒性(P<0.05).与正常细胞组相比,香烟提取物组 IL-8及TNF-α表达上调,胞内NF-κB p50、p65及p-IκB表达亦升高(P<0.05),NF-κB核转位增加(P<0.05);益肺活血方可抑制诱导后的IL-8和TNF-α的表达以及NF-κB活性(P<0.05).结论 益肺活血方可减少香烟提取物诱导的巨噬细胞表达IL-8 、TNF-α,抑制NF-κB活化可能是其机制之一.
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