论文部分内容阅读
摘 要：口腔液具有广泛的生物学功能，可替代血清样品用于抗原或抗体的检测，为猪群传染病监测提供了有效的技术手段，目前已经成功应用至猪蓝耳病、猪圆环病毒病、猪流感等疫病的监测。本文对猪口腔液在部分猪传染病上的应用进展、猪口腔液采集方法及其注意事项等进行了综述，以期对猪口腔液的推广应用提供技术帮助。
关键词：猪；口腔液；疫病监测；应用进展
中图分类号：S852.5 3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）06-0037-02
所谓口腔液，即是指猪口腔中的唾液和血清渗出液的混合液体，血清渗出液是通过口腔黏膜和口腔黏膜上的齿龈沟和毛细血管进入口腔。业已证实，口腔液具有广泛的生物学功能，口腔液样品既可用作抗体检测，又可用于PCR检测抗原，可替代血清样品，为猪群传染病监测提供有效的技术手段，口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒、经典猪瘟病毒、流感病毒、蓝耳病病毒、圆环病毒2型、细环病毒1型和2型、丹毒丝菌属、胞内劳森氏菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌、猪鼻支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体以及还有其他的一些病原体都可以采用口腔液进行检测。虽然口腔液样品主要采自于断奶猪和生长育肥猪，但也适用于后备种猪、生产母猪和生产公猪。口腔液采集，方法简便，易学易用，速度快，应急小，费用低，不需要专门器材和特殊的技巧训练，并可减少应激，改善动物福利，有助于猪群生长性能的提高，确是评估猪群实时健康动态的良好工具。
1 猪口腔液在部分猪传染病上的应用
1.1 猪流感
Detmer SE等[1]采集人工感染A型猪流感H1N1亚型毒株后3 d、4 d、5 d和6 d的试验猪唾液样品，并采集感染后3 d和7 d的猪鼻拭样品。经荧光PCR检测和病毒分离，所有样品病毒分离均为阴性，但口腔液样品的PCR阳性检出率达94 %（15 /16），猪鼻拭样品的阳性检出率则为67 %（32 /48）。于2009年8月和2010年1月又进行了扩大应用试验，经荧光PCR检测，结果从910份猪口腔液样品中检出382份阳性，阳性率为42 %。由此可见，口腔液能为荧光PCR之类的快速检测方法提供简易、有效和安全的样品采集方法。
1.2 蓝耳病
Prickett J等[2]分别对4、8和12周龄的受试猪接种美洲型PRRSV，于接种后63 d同步采集血样和口腔液，采用荧光PCR检测PRRSV抗原。结果发现血样于接种后5周检出病毒，而口腔液则于接种后4周检出病毒，且猪接种日龄不影响口腔液中PRRSV滴度或持续时间，表明口腔液样品具有不亚于血样的检测灵敏度。业已证实采集和检测断奶前仔猪口腔液样品中的PRRSV，可监控生产母猪群体中PRRSV感染动态，如阳性则表明持续感染的母猪将病毒传播给了断奶前仔猪。Kittawornrat A等[3]于2014年同步采集断奶前1 d仔猪的口腔液和血样，以荧光PCR检测PRRSV。结果600份血样中未检出PRRSV阳性，而600份口腔液样品中检出9头阳性，阳性率为1.5 %。经PRRSV ORF5基因测序，表明其中2头阳性样品的基因序列与猪场野毒株高度同源。在第23届世界猪病大会上，美国学者报道可采集屠宰场上市育肥猪口腔液以评估PRRSV感染动态，使用ELISA方法检测抗体，92份样品中18份为抗体阳性，平均s/p值=3.63，74份为抗体阴性，平均s/p值=0.195。而对于PCR测毒，感染猪口腔液中病毒的检测持续期可达3～8周。
1.3 圆环病毒病
Prickett JR等[4]设计了3个人工感染PCV2a、2b毒株试验组，另设对照组，每组6头猪。从接种后2 d～14 d每2 d采集一次猪口腔液，从接种后15 d～98 d每周采集一次猪口腔液。以定量PCR方法检测PCV2抗原，以ELISA方法检测PCV2抗体。结果猪人工感染后14 d～98 d可检出针对PCV2的IgG、IgA抗体，而从人工感染后2 d可检出PCV2抗原，直至接种后98 d仍维持阳性。实验表明，猪口腔液可作为监测PCV2抗原和抗体实时动态的有效样品。
1.4 猪丹毒
Giménez-Lirola LG等[5]对7个圈舍的112头猪人工感染猪丹毒丝菌，32头猪作为阴性对照。经荧光PCR检测猪口腔液样品，接种后1 d受试猪阳性检出率达100 %（7 /7），细菌分离成功率为28.6 %（2 /7），从而证明口腔液检测可为猪丹毒疫情的及时预警提供帮助。
1.5 猪流行性腹泻
在第23届世界猪病大会上，墨西哥学者对感染PEDV猪只的口腔液样品进行PCR检测，取得了和肠道组织一致的效果。因此，可用口腔液作为检测PEDV在猪群中存在或循环的标志性样品。
2 猪口腔液采集方法
将100 %纯棉绳悬挂于猪栏的干净区域，直径1.3 cm的绳子用于保育猪口腔液采集，直径1.6 cm的绳子则用于生长育肥猪和生产公母猪。绳子上端打结，并做好固定。悬挂处应远离饲槽和猪排便区，悬挂高度应高于猪身但保证猪能接近和啃咬，任猪咀嚼，30 min后收取棉绳，刮取和挤压上面的口腔液至塑料板或玻璃皿中，再将口腔液吸取至试管中备用，理论上至少能收集到4 mL的采样量，但一般认为≥1 mL为有效采集量。如果口腔液样品比较干净，则无需再作处理；如果样品混有其它颗粒物，则低速离心10 min即可。
3 口腔液检测的注意事项
（1） 口腔液检测并非疫病诊断或检测标准中的程序，仅用于猪群中循环抗体或抗原的检测和评估。
（2） 口腔液样品不要混样。
（3） 棉绳吸收性最好，合成纤维绳则效果稍差。
（4） 有的猪群第一次可能不太情愿啃咬绳子，可先将绳子供其玩弄，或在绳子上喷洒糖溶液，一旦习惯养成，而后再采集就方便了。
（5） 猪上午活动敏捷，因此宜于在该时间段采样，午后则可能花费时间较长。
（6） 绳子的悬挂高度应与猪肩胛部平。
（7） 猪有喜新厌旧的心理，已经使用的绳子不宜再用。
4 结语
人医早在1909年就有从人口腔液中检出疫病抗体的文献报道，目前已经广泛使用口腔液作为麻疹、腮腺炎、肝炎等疾病初步诊断分析的样品。虽然兽医学上使用口腔液作为疫病监测的时间不算长，但已经迈出了可喜的步伐，目前在许多动物疫病的诊断和监测上已经得到了研究和应用，也势必将日益获得重视和推广，从而为猪群健康评估提供良好的采样工具。
参考文献：（5篇，略）
关键词：猪；口腔液；疫病监测；应用进展
中图分类号：S852.5 3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）06-0037-02
所谓口腔液，即是指猪口腔中的唾液和血清渗出液的混合液体，血清渗出液是通过口腔黏膜和口腔黏膜上的齿龈沟和毛细血管进入口腔。业已证实，口腔液具有广泛的生物学功能，口腔液样品既可用作抗体检测，又可用于PCR检测抗原，可替代血清样品，为猪群传染病监测提供有效的技术手段，口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒、经典猪瘟病毒、流感病毒、蓝耳病病毒、圆环病毒2型、细环病毒1型和2型、丹毒丝菌属、胞内劳森氏菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌、猪鼻支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体以及还有其他的一些病原体都可以采用口腔液进行检测。虽然口腔液样品主要采自于断奶猪和生长育肥猪，但也适用于后备种猪、生产母猪和生产公猪。口腔液采集，方法简便，易学易用，速度快，应急小，费用低，不需要专门器材和特殊的技巧训练，并可减少应激，改善动物福利，有助于猪群生长性能的提高，确是评估猪群实时健康动态的良好工具。
1 猪口腔液在部分猪传染病上的应用
1.1 猪流感
Detmer SE等[1]采集人工感染A型猪流感H1N1亚型毒株后3 d、4 d、5 d和6 d的试验猪唾液样品，并采集感染后3 d和7 d的猪鼻拭样品。经荧光PCR检测和病毒分离，所有样品病毒分离均为阴性，但口腔液样品的PCR阳性检出率达94 %（15 /16），猪鼻拭样品的阳性检出率则为67 %（32 /48）。于2009年8月和2010年1月又进行了扩大应用试验，经荧光PCR检测，结果从910份猪口腔液样品中检出382份阳性，阳性率为42 %。由此可见，口腔液能为荧光PCR之类的快速检测方法提供简易、有效和安全的样品采集方法。
1.2 蓝耳病
Prickett J等[2]分别对4、8和12周龄的受试猪接种美洲型PRRSV，于接种后63 d同步采集血样和口腔液，采用荧光PCR检测PRRSV抗原。结果发现血样于接种后5周检出病毒，而口腔液则于接种后4周检出病毒，且猪接种日龄不影响口腔液中PRRSV滴度或持续时间，表明口腔液样品具有不亚于血样的检测灵敏度。业已证实采集和检测断奶前仔猪口腔液样品中的PRRSV，可监控生产母猪群体中PRRSV感染动态，如阳性则表明持续感染的母猪将病毒传播给了断奶前仔猪。Kittawornrat A等[3]于2014年同步采集断奶前1 d仔猪的口腔液和血样，以荧光PCR检测PRRSV。结果600份血样中未检出PRRSV阳性，而600份口腔液样品中检出9头阳性，阳性率为1.5 %。经PRRSV ORF5基因测序，表明其中2头阳性样品的基因序列与猪场野毒株高度同源。在第23届世界猪病大会上，美国学者报道可采集屠宰场上市育肥猪口腔液以评估PRRSV感染动态，使用ELISA方法检测抗体，92份样品中18份为抗体阳性，平均s/p值=3.63，74份为抗体阴性，平均s/p值=0.195。而对于PCR测毒，感染猪口腔液中病毒的检测持续期可达3～8周。
1.3 圆环病毒病
Prickett JR等[4]设计了3个人工感染PCV2a、2b毒株试验组，另设对照组，每组6头猪。从接种后2 d～14 d每2 d采集一次猪口腔液，从接种后15 d～98 d每周采集一次猪口腔液。以定量PCR方法检测PCV2抗原，以ELISA方法检测PCV2抗体。结果猪人工感染后14 d～98 d可检出针对PCV2的IgG、IgA抗体，而从人工感染后2 d可检出PCV2抗原，直至接种后98 d仍维持阳性。实验表明，猪口腔液可作为监测PCV2抗原和抗体实时动态的有效样品。
1.4 猪丹毒
Giménez-Lirola LG等[5]对7个圈舍的112头猪人工感染猪丹毒丝菌，32头猪作为阴性对照。经荧光PCR检测猪口腔液样品，接种后1 d受试猪阳性检出率达100 %（7 /7），细菌分离成功率为28.6 %（2 /7），从而证明口腔液检测可为猪丹毒疫情的及时预警提供帮助。
1.5 猪流行性腹泻
在第23届世界猪病大会上，墨西哥学者对感染PEDV猪只的口腔液样品进行PCR检测，取得了和肠道组织一致的效果。因此，可用口腔液作为检测PEDV在猪群中存在或循环的标志性样品。
2 猪口腔液采集方法
将100 %纯棉绳悬挂于猪栏的干净区域，直径1.3 cm的绳子用于保育猪口腔液采集，直径1.6 cm的绳子则用于生长育肥猪和生产公母猪。绳子上端打结，并做好固定。悬挂处应远离饲槽和猪排便区，悬挂高度应高于猪身但保证猪能接近和啃咬，任猪咀嚼，30 min后收取棉绳，刮取和挤压上面的口腔液至塑料板或玻璃皿中，再将口腔液吸取至试管中备用，理论上至少能收集到4 mL的采样量，但一般认为≥1 mL为有效采集量。如果口腔液样品比较干净，则无需再作处理；如果样品混有其它颗粒物，则低速离心10 min即可。
3 口腔液检测的注意事项
（1） 口腔液检测并非疫病诊断或检测标准中的程序，仅用于猪群中循环抗体或抗原的检测和评估。
（2） 口腔液样品不要混样。
（3） 棉绳吸收性最好，合成纤维绳则效果稍差。
（4） 有的猪群第一次可能不太情愿啃咬绳子，可先将绳子供其玩弄，或在绳子上喷洒糖溶液，一旦习惯养成，而后再采集就方便了。
（5） 猪上午活动敏捷，因此宜于在该时间段采样，午后则可能花费时间较长。
（6） 绳子的悬挂高度应与猪肩胛部平。
（7） 猪有喜新厌旧的心理，已经使用的绳子不宜再用。
4 结语
人医早在1909年就有从人口腔液中检出疫病抗体的文献报道，目前已经广泛使用口腔液作为麻疹、腮腺炎、肝炎等疾病初步诊断分析的样品。虽然兽医学上使用口腔液作为疫病监测的时间不算长，但已经迈出了可喜的步伐，目前在许多动物疫病的诊断和监测上已经得到了研究和应用，也势必将日益获得重视和推广，从而为猪群健康评估提供良好的采样工具。
参考文献：（5篇，略）