NACK的下调对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖、凋亡的影响n

来源 :中华实用儿科临床杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qwc198762
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目的:探讨n NACK基因表达下调对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。n 方法:通过慢病毒转染技术感染Jurkat细胞,使n NACK基因表达下调,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot检测n NACK基因的沉默效率;CCK-8法、流式细胞术检测n NACK下调后对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Notch1信号传导通路下游相关蛋白Hes1、c-Myc的表达情况。n 结果:NACK-短发夹RNA(shRNA)通过慢病毒载体成功转染Jurkat细胞后,n NACK mRNA及蛋白表达量明显降低(n P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,CCK-8法显示实验组细胞增殖受到明显抑制[实验组、阴性对照组和空白对照组细胞抑制率分别为(37.27±4.48)%、(4.25±2.10)%和(2.43±1.40)%](n F=132.640,n P<0.05),流式细胞术检测实验组细胞凋亡明显增加[实验组、阴性对照组和空白对照组细胞凋亡率分别为(26.38±3.03)%、(6.07±2.61)%和(3.40±1.98)%](n F=90.534,n P<0.05);Western blot结果证实Notch1通路相关蛋白Hes1、c-Myc的表达量较阴性对照组及空白对照组下调,差异有统计学意义(n P<0.05)。n 结论:靶向沉默n NACK可下调Notch1信号通路相关蛋白的表达,导致Jurkat细胞增殖抑制、细胞凋亡增多,从而发挥其抗T淋巴细胞白血病的作用。n “,”Objective:To investigate the effect and mechanism of n NACK knockdown on the proliferation and apoptosis of T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) Jurkat cells.n Methods:Lentivirus transfection technology was used to transfect Jurkat cells and knock down n NACK gene.Real time fluorescent quantitative PCR and Western blot were used to detect the silencing efficiency of n NACK gene.CCK-8 method and flow cytometry were used to detect the effects of n NACK knockdown on the proliferation and apoptosis of Jurkat cells.The expressions of protein related with Notch1 pathway, such as Hes1 and c-Myc, were detected by Western blot.n Results:After n NACK-shRNA was successfully transfected into Jurkat cells by lentiviral vector, the expression of n NACK mRNA and protein was reduced signi-ficantly (n P<0.05). Compared with the negative control group and the blank control group, the CCK-8 method showed that the cell proliferation in the experimental group was significantly inhibited [The inhibition rates of cell proliferation in the experimental group, negative control group and blank control group were (37.27±4.48)%, (4.25±2.10)% and (2.43±1.40)%, respectively](n F=132.640, n P<0.05), and the flow cytometry test showed that the apoptosis in the experimental group increased significantly [The apoptosis rates of experimental group, negative control group and blank control group were (26.38±3.03)%, (6.07±2.61)% and (3.40±1.98)%, respectively](n F=90.534, n P<0.05). Western blot results confirmed that the expression of Notch1 pathway-related proteins Hes1 and c-Myc was down-regulated compared with the negative control group and the blank control group, and the difference was statistically significant (n P<0.05).n Conclusions:Targeting silent NACK can down-regulate the expression of Notch1 pathway-related proteins, which leads to the inhibition of Jurkat cell proliferation and increased apoptosis, thereby exerting its anti-T-ALL effect.
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