目的 体外实验探究黄芪补肾活血汤通过HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴治疗乳腺癌骨转移的作用机制。方法 采用细胞增殖与毒性检测（CCK-8）法检测细胞活力，观察黄芪补肾活血汤(0、20、40 mg·mL-1)对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和活力的影响；迁移实验检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7迁移水平的影响；Transwell实验检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7侵袭水平的影响；流式细胞术检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7凋亡作用的影响；共培养乳腺癌细胞MCF-7、成骨细胞MC3T3-E1后蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测黄芪补肾活血汤对共培养后的成骨细胞MC3T3-E1中缺氧诱导因子-1α（HIF1α）、Smad家族成员1（Smad1）、Smad家族成员5（Smad5）、Runt相关转录因子2（Runx2）以及锌指转录因子（Osterix）的蛋白表达情况的影响。结果 体外实验中，-CCK-8法显示，与control组相比，20、40 mg·mL-1质量浓度的黄芪补肾活血汤干预MCF-7细胞48 h后能不同程度的降低MCF-7细胞的增殖和细胞活力，呈剂量依赖性。划痕实验表明，与control组相比，黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组细胞迁移率明显降低（P＜0.01），呈剂量依赖性。Transwell检测结果显示，与control组相比，黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组穿膜细胞数明显减少（P1＜0.001），呈剂量依赖性。流式细胞术检测结果显示，与control组相比，黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-、40 mg·mL-1)组凋亡率明显升高（P＜0.001），呈剂量依赖性。平板克隆实验结果显示，黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组的细胞克隆个数明显少于control组（P＜0.05），呈剂量依赖性。EDU增殖实验显示，与control组相比，黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组细胞阳性率明显降低（P＜0.05），呈剂量依赖性。Western blot实验表明，与control组比较，不同质量浓度的黄芪补肾活血汤作用于成骨细胞MC3T3-E1后，HIF1α、Osterix蛋白相对表达水平降低（P＜0.01）,Smad1、Smad5、Runx2蛋白表达升高（P＜0.01），呈剂量依赖性。结论 黄芪补肾活血汤通过HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴剂量依赖性抑制乳腺癌细胞MCF-7活力，通过HIF1α靶点改善肿瘤缺氧微环境，通过Osterix靶点抑制肿瘤血管生成和癌细胞迁移；并通过Smad1、Smad5、Runx2等靶点等促进骨髓间充质细胞成骨分化、成熟，保护骨质，促进新骨形成，抑制并缓解骨转移。