肠道微生物与宿主关系密切,对宿主具有增强肠道粘膜塑性、分泌消化酶帮助消化、抵御病原微生物等益处,因此近年来,肠道微生物的群落组成及其影响因素受到研究人员的广泛关注。东风螺和鲍是中国重要的经济养殖贝类,本研究以方斑东风螺、泥东风螺、皱纹盘鲍与“绿盘鲍”新品种为研究对象,利用16S rRNA测序和宏基因组测序技术,探究饵料与温度对四种海洋贝类肠道微生物群落组成及功能的影响。现有主要结果如下:1.16S rRNA测序结果表明,东风螺肠道与其养殖水环境、投喂饵料的微生物物种组成有明显区别。东风螺肠道微生物的优势类群是支原体和弧菌属,而东风螺养殖水环境和饵料中支原体的相对丰度很低。探究饵料对东风螺肠道微生物的影响,发现方斑东风螺不同饵料组的肠道微生物结构受饵料的影响比泥东风螺的更明显。在方斑东风螺饵料组间共发现39个差异菌群,在泥东风螺饵料组间发现13个差异菌群。三种饵料组间的差异功能利用MetaGO鉴别,基于功能预测得到的KOs相对丰度表,共发现20个KOs在牡蛎组中丰度较高。其中有5个KOs被注释为丙二酸脱羧酶的5个亚基,丙二酸脱羧酶是许多厌氧菌分解利用丙二酸的重要物质,这些厌氧菌往往可以利用丙二酸作为唯一碳源;有3个KOs被注释为与谷胱甘肽转运系统相关的功能,此系统中的蛋白质在锌的解毒过程中发挥重要作用,猜测可能与东风螺对牡蛎在海域中富集重金属进行解毒有关。2.16S rRNA测序结果表明,鲍肠道中的优势菌群为支原体、Psvchrilyobacter和弧菌属,而养殖水环境和饵料中前两个类群的相对丰度都很低。探究饵料及温度对鲍肠道微生物的影响,发现两种鲍肠道微生物受饵料和温度的影响程度不同,皱纹盘鲍更易受到温度影响而绿盘鲍更易受到饵料影响。3.鉴别鲍肠道微生物三种饵料组间相对丰度具有差异的菌群,在皱纹盘鲍饵料组间共发现33个差异菌群,在绿盘鲍饵料组间共发现31个差异菌群。对鲍饵料组间的差异功能进行分析,发现26个KOs在龙须菜组中的丰度较高;有13个KOs在海带组中丰度较高,其中3个KOs的注释功能涉及磷酸转移酶系统。鉴别鲍肠道微生物三个温度组间相对丰度具有差异的菌群,在皱纹盘鲍温度组间共发现25个差异菌群,在绿盘鲍温度组间共发现24个差异菌群。对鲍温度组间的差异功能进行分析,发现224个KOs在常温组中的丰度较高,其功能大多数被注释到碳水化合物代谢相关功能,或者是参与生化过程中的常见蛋白质,说明水温的升高或降低都会使鲍肠道微生物的功能出现一定程度的紊乱。另外,有742个KOs在高温组中的丰度较低,其中有4个KOs被注释到海藻糖/麦芽糖转运系统,此系统参与糖类代谢中转运海藻糖或麦芽糖。4.对10个鲍肠道微生物样品进行宏基因组测序,共获得约20Gb的有效测序序列。分两个阶段对有效序列进行组装,可得一个大小为520.89Mb的contigs集合,共获得5,433,422条基因。对基因集进行去冗余,得到含有541,241条基因的非冗余基因集。将宏基因组有效序列比对到现有的NCBI细菌及古菌基因组数据库中,获得的肠道微生物种类及丰度与16S rRNA测序结果相似。在门水平,变形菌门的相对丰度在两种情况下均为最高,在属水平,支原体和弧菌属的相对丰度均较高。功能注释方面,将非冗余基因集比对至数据库中,得到22,565个GOTerms和11,413个KOs,统计这些功能注释的物种来源,有83.39%都是来源于细菌。用Wilcoxon秩和检验分析高温下皱纹盘鲍与绿盘鲍肠道微生物的差异基因,发现在高温条件下绿盘鲍肠道微生物用于维持正常新陈代谢、保持细胞形态的功能较皱纹盘鲍丰度更高。