FaDREB1转录因子基因的克隆及其转化研究

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  干旱、盐碱及低温是影响植物生长和农作物产量的三种主要的非生物胁迫因子。提高农作物的抗逆性,以适应日益增长的世界人口对粮食的需求,是目前农业发展的重大课题之一。到目前为止,有效抗逆基因的分离与鉴定仍然是农作物抗逆基因工程的主要限制因子。   植物中与低温、干旱和高盐胁迫应答有关的基因,它们的启动子区域中都含有核心序列为CCGAC的顺式调控元件,称为DRE(dehydrationresponsiveelement)。DREB(DREbindingprotein)是一种特异性转录因子,植物在低温、干旱及高盐逆境胁迫下,DREB基因被诱导表达,然后表达产物与DRE特异结合,在转录水平调控下游与抗逆性相关的多个功能基因的表达,最终使植物的抗逆性得到提高。因此,DREB类转录因子能够综合改良植物的抗逆性状,是迄今为止较为理想的抗逆工程基因。利用cDNA末端的快速扩增(RACE)技术,从4℃低温胁迫诱导的草坪草高羊茅中,首次成功克隆到DREB类转录因子基因的全长cDNA序列,命名为FaDREB1。   以研究基因的功能与应用为目的,从FaDREB1基因的沉默表达、超量表达、诱导表达以及与对rd29A启动子的诱导四个角度,成功的构建了四个植物表达载体;并构建了pBI121L-FaDREB1-rd29A的对照载体pBI121L-rd29A。采用冻融法,将以上五个植物表达载体成功的转入根癌农杆菌LBA4404中。   首次用RNAi的方法来使DREB类转录因子基因沉默。对研究RNAi的作用机理和RNAi的表达载体的构建以及应用,进行了初步探索。利用水稻日本晴的成熟胚,成功地诱导出了愈伤组织,并获得了农杆菌侵染后的生长旺盛的抗性愈伤组织。
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