近年来,II型糖尿病和肥胖的发病率正呈现逐年上升的趋势,严重威胁着人类的健康。以α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶作为主要的作用靶点,探索毒性低且副作用小的天然黄酮类化合物成为研究II型糖尿病和肥胖防治领域的热点之一。柑橘黄酮是一种主要存在于柑橘皮渣中的活性物质,具有抗氧化、防癌、抗病毒等作用。探究柑橘黄酮与消化相关酶的相互作用机理对防治II型糖尿病和肥胖以及有效利用柑橘副产物资源具有重要意义。本文采用荧光光谱技术研究圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮与α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶相互作用的猝灭类型;计算三种柑橘黄酮与三种酶的结合常数、结合位点数、热力学参数;探究柑橘黄酮-酶复合物的主要作用力类型;通过同步荧光光谱、三维荧光光谱、圆二色光谱和傅里叶变换红外光谱研究圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮分别与α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶相互作用后,对酶蛋白氨基酸残基微环境和二级结构的影响;通过分子对接实验探究圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮分别与α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶相互作用特征。本文的主要实验结果如下:1.圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮分别能与α-葡萄糖苷酶自发的结合,并静态猝灭α-葡萄糖苷酶的内源荧光,主要作用力为疏水作用力且只有一个结合位点,在298 K时,结合常数分别为(7.02±0.22)×10~4、(4.57±0.16)×10~4和(5.70±0.12)×104 L·mol-1。三种柑橘黄酮与α-葡萄糖苷酶结合,使α-葡萄糖苷酶的酪氨酸和色氨酸残基所处微环境发生改变,导致酶分子的二级结构发生变化。分子对接实验结果表明三种柑橘黄酮分别能与α-葡萄糖苷酶周围氨基酸残基相互作用。2.圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮分别能自发与α-淀粉酶结合,并形成复合物,且只有一个结合位点,结合常数分别为(1.26±0.12)×105、(4.90±0.08)×104和(1.51±0.12)×105 L·mol-1(298 K)。三种柑橘黄酮以静态猝灭形式猝灭α-淀粉酶的内源荧光,主要作用力为疏水作用力。三种柑橘黄酮与α-淀粉酶结合,使α-淀粉酶的酪氨酸和色氨酸残基所处微环境改变并能导致酶分子的二级结构改变。分子对接实验结果表明三种柑橘黄酮分别能与α-淀粉酶周围氨基酸残基相互作用。3.圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮分别能自发与胰脂肪酶结合且只有一个结合位点,结合常数分别为(2.66±0.03)×10~5、(1.58±0.04)×10~5和(7.94±0.06)×105 L·mol-1(298 K)。三种柑橘黄酮对胰脂肪酶的内源荧光产生静态猝灭作用,主要作用力为疏水作用力。三种柑橘黄酮与胰脂肪酶结合,使胰脂肪酶的色氨酸残基所处微环境发生改变同时导致酶分子的二级结构发生变化。分子对接实验结果表明三种柑橘黄酮分别能与胰脂肪酶周围氨基酸残基相互作用。以上研究结果证明,圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮都能自发地以静态猝灭机制猝灭α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶的内源性荧光,并且能够改变三种酶氨基酸微环境和蛋白质二级结构。本研究将为圣草次苷、圣草酚和甜橙黄酮作为同时能与α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和胰脂肪酶结合的“多靶点”活性物质,在防治II型糖尿病及肥胖的领域研究中提供一定的理论与实验依据。