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目的：体外诱导酵母相马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffei, PM)对氟康唑(Fluconazole, FCZ)耐药,筛选同一亲本PM耐药株及敏感株,通过采用分子生物学方法从基因水平探讨PM FCZ耐药基因序列(GenBank:AL684103.1)的表达情况,比较PM耐药株和敏感株FCZ耐药基因在转录水平上表达量的差异,为分析PM菌株耐药性与耐药基因的表达规律,从基因水平加深对PM耐药性的研究及为马尔尼菲青霉病(Penicilliosis marneffei, PSM)临床用药及预后监测提供参考依据。方法：采用FCZ浓度递增法,从每株PM的1/2最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC值)开始诱导,逐步增加FCZ浓度为2MIC、4MIC……,将FCZ最高诱导浓度设为32μg/ml,对11株酵母相PM进行体外诱导耐药,同时按临床实验室标准委员会(CLSI,原称NCCLS)颁布M38-A方案微量稀释法测其MIC值变化,筛选耐药菌株及其对应的敏感株,通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-Time fluomgenetic quantitative PCR, FQ-PCR)测定耐药株及敏感株PM FCZ耐药基因的表达量,比较分析PM的MIC值变化前后、不同MIC值PM组间与FCZ耐药基因表达量的关系。结果：1.11株酵母相PM经体外FCZ浓度递增法诱导后MIC值均升高,8株PM(H1、H3、H4、H6、H7、H8、Hl0、H11)达到耐药判断标准,其中5株PM(H1、H3、H4、H6、H7)MIC值为64μg/ml,3株PM(H8、Hl0、H11)MIC值为128μg/ml。另外,H2、H5、H9诱导后达到中敏状态。2.8株酵母相PM诱导前及经FCZ诱导后,FCZ耐药基因在PM中均表达,表达量由诱导前的2.56±1.84上升至7.50±3.00,经配对设计t检验,P<0.05,差别有统计学意义,8株PM经FCZ诱导后组FCZ耐药基因表达量高于诱导前组；每株PM经FCZ诱导后FCZ耐药基因表达量均有不同程度的上升,其中H3上升幅度最明显,诱导后FCZ耐药基因表达量为诱导前的16.4倍,8株PM诱导后FCZ耐药基因表达量上升幅度范围在1.8-16.4倍之间。A组(MIC值4μg/ml PM组)与C组(MIC值PM组)、D组(MIC值64μg/ml PM组)FCZ耐药基因表达量相比,B组(MIC值8μg/mlPM组)与D组FCZ耐药基因表达量相比,E组(MIC值128μg/ml PM组)与A、B、C、D组FCZ耐药基因表达量相比,采用方差分析统计学方法,以上组间比较P值均<0.05,差别有统计学意义,而A组与B组、B组与C组、C组与D组的组间比较,P值均<0.05,统计学无明显差异。结论：1.采用FCZ浓度递增法可成功在体外诱导酵母相PM耐药,为其耐药机制的研究奠定了基础,也为临床合理用药提供了理论依据。2.PM对FCZ的耐药性可能与FCZ耐药基因的表达有关。3.FCZ耐药基因的表达可以使PM药物外排能力增加,从而导致PM对FCZ不敏感或耐药,同时可能有其他机制参与临床PM耐药性的生成。