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本试验的目的是优化猪核移植技术条件，探索猪核移植技术原理，简化猪核移植方法及程序，提高核移植效率。以便在本实验室建立高效的动物核移植技术研究平台，为进一步生产克隆动物创造条件。本研究分别以极体排出比率、孤雌激活卵裂比率、核移植重构胚胎卵裂比率和8-细胞以上胚胎生成比例为试验效果的检测统计指标，对猪卵母细胞体外成熟最佳条件和成熟时间，对去核、移核方法和激活方式三个主要环节进行了研究，优化了试验条件，获得了简化的核移植技术程序。 试验表明，以TCM199为基础培养基进行猪卵母细胞体外成熟培养时，添加AA或EGF组的成熟率均极显著高于添加AA+EGF组和对照组(P＜0.01)，四者的成熟率分别为80.6％、81.2％、64.4％、66.2％；其中AA与EGF组间、AA+EGF组和对照组间的成熟率差异都不显著(P＞0.05)。对各组成熟的卵母细胞孤雌激活后发现：AA与EGF组的卵裂率无显著差异(74.8％vs74.2％，P＞0.05)，但都极显著高于AA+EGF组和对照组(61.5％、63.4％，P＜0.01)；AA、EGF、AA+EGF和对照组的8-细胞以上胚胎比例分别为32.6％、35.5％、26.9％、28.1％，其中AA与EGF组均极显著高于AA+EGF和对照组(P＜0.01)，EGF组显著高于AA组(P＜0.05)，AA+EGF和对照组间差异不显著(P＞0.05)。上述结果表明在猪卵母细胞培养时添加一定量AA或EGF能提高其成熟率和卵母细胞质量。 猪卵母细胞体外培养39～48h内，随培养时间的延长卵母细胞成熟率逐渐升高，而去核率却逐次降低，在39～41h、42～44h、45～48h三个时间段猪卵母细胞的成熟率分别为70.8％、80.1％、81.2％，去核率分别为82.4％、82.2％、79.6％。随后的核移植重组胚培养结果表明：39～41h组的卵裂率极显著低于42～44h组(37.2％vs41.8％)和45～48h组(37.2％vs43.0％，P＜0.01)，8-细胞以上的胚胎比例也显著低于42～44h组(15.0％vs17.5％，P＜0.05)，同时极显著低于45～48h组(15.0％vs20.9％，P＜0.01)；45～48h组的卵裂率和8-细胞以上的胚胎比例均高于42～44h组，但两组间的差异不显著(P＞0.05)。因此，综合考虑，核移植时选用体外成熟45～48h的猪卵母细胞能提高总体去核效率和重组胚的发育能力。 去核时，盲吸法的去核率极显著低于荧光染色去核法(80.0％vs91.8％，P＜0.01)，随后盲吸法去核构建的重组胚卵裂率和8-细胞以上胚胎比例均高于荧光染色去核法，但差异不显著(42.9％vs41.7％，23.1％vs19.7％，P＞0.05)。说明荧光染色去核法不仅可以提高去核效率，