群体感应（Quorum sensing,QS）是细菌通过特殊的化学信号分子进行社交的一种方式。信号分子依赖于细胞密度,扮演着细胞间通讯的媒介作用来调控细胞生理代谢活动。假交替单胞菌是一类新型的海洋细菌,其广泛存在于海洋环境中,能产生多种活性物质。越来越多的研究发现假交替单胞菌活性物质的产生受QS的调控,但假交替单胞菌QS系统及其调控机制研究尚比较缺乏。实验室前期从西门岛红树林海泥分离到一株具有QS能力的假交替单胞菌T1lg65,本论文旨在表征菌株T1lg65中Lux I/R型群体感应特性,探究严谨饥饿蛋白A（Stringent Starvation Protein A,SspA）对其调控作用。通过基因组注释发现菌株T1lg65存在一个信号分子合成酶基因lux I和信号分子受体蛋白基因lux R。基因敲除和回补实验发现:Δlux I和Δlux R丧失了产信号分子的能力,而Δlux I^c和Δlux R^c可以恢复到野生型表型,使信号分子指示菌A136显蓝色。随之将lux I在E.coli BL21中重组表达,重组大肠杆菌也能使指示菌A136变蓝。对基因组进一步分析,发现lux I和lux R处于上下游关系;PCR检测发现lux I和lux R是共转录的,且在Δlux I中lux R的相对表达量显著性下降,Δlux R中lux I的相对表达量显著性下降。序列分析发现lux I转录起始附近存在3个“lux-box”位点,即Lux R结合位点。综上,菌株T1lg65存在典型的Lux I/Lux R型QS系统,Lux I和Lux R存在互作关系。之后利用报告平板法和TLC技术分析了菌株T1lg65中信号分子产生情况和信号分子种类,发现在振荡培养12 h的情况下产生的信号分子的量最多,所产信号分子共4种,可能为3-oxo-C₆-HSL、3OH-C₈-HSL、3-oxo-C₈-HSL和C₈-HSL。通过探究SspA-HNS-RpoS调控系统对QS的影响,发现Δrpo S和Δhns仍具有产信号分子的能力,但Δrpo S使指示菌A136显蓝的能力较弱,说明该菌株产生的信号分子较少。有趣的是,ΔsspA无法使指示菌A136显蓝,回补sspA基因后ΔsspA^c菌株又恢复了WT的表型。q PCR分析发现:在Δhns中lux I和lux R的相对表达量显著上升,而在Δrpo S和ΔsspA中lux I和lux R的相对表达量显著下降。以上结果表明SspA和RpoS正调控QS系统,而H-NS负调控QS系统。随后考察了SspA、H-NS和RpoS在调控QS系统时的相互关系,结果发现在Δhns中rpo S的相对表达量显著上升,而Δrpo S菌株中hns的相对表达量变化不大;在ΔsspA中rpo S的相对表达量显著下降,而hns的相对表达量显著性上升;在Δhns和Δrpo S中sspA的相对表达量均变化不大。为进一步证明,我们利用报告系统检测P_{rpo S}和P_hns活性,发现P_{rpo S}活性在Δhns中显著上升,且P_hns活性在ΔsspA中也显著上升。综上,SspA负调控hns,同时H-NS又负调控rpo S;SspA间接正调控rpo S;H-NS和RpoS对sspA没有调控作用。序列分析发现在sspA基因上游区域存在一个“lux-box”,转录水平分析发现在Δlux R中sspA和rpo S的相对表达量均显著下调,而hns的相对表达量显著上升。报告系统检测发现在在Δlux R中,P_sspA活性有明显下降。由此推测,Lux R可能通过sspA上游的“lux-box”在转录水平上对sspA起正调控作用,由此负调控hns,最后正调控rpo S。基于以上实验结果,我们推测SspA通过三条途径来调控QS系统:（1）SspA正调控lux IR,而Lux R还通过sspA上游的“lux-box”正调控sspA,两者之间存在互作关系;（2）SspA通过H-NS间接正调控lux IR。SspA负调控hns,H-NS负调控lux IR;（3）H-NS负调控rpo S,RpoS正调控lux IR,从而使sspA间接调控luxIR。