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前言 真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的聚合和激活来调节控制的，其正常与否与细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关。参与细胞周期调控的主要分子有：周期蛋白（cyclin），cyclin依赖性激酶（CDKs）和CDKs抑制蛋白（CDKI）。其中CDKI通过与细胞cyclin，CDK或细胞cyclin-CDK复合物的结合，抑制了CDK的活性，导致其细胞周期停止并阻断细胞的增殖过程。目前发现的CDKI按结构和功能的不同可分成两大类：一类为Cip/Kip（CDK-interacting protein/kinase inhibition protein），包括p21Cip1、p27kip1、p57kip2等。这一组蛋白与cyclin-CDK复合物的结合较单独与cyclin或CDK结合更充分，并可广泛作用于各种细胞cyclin-CDK复合物，发挥其抑制活性。另一类为Ink4（Inhibitor of CDK4），包括p16、p15、P18和p19。由于CDKI的生物化学功能及其调节方式，决定了它们在细胞生长的重要阶段中具有重要作用。作为CDK的抑制蛋白，已证明一些CDKI是潜在的肿瘤抑制因子或抑癌基因。p27kip1，作为一个周期素依赖性激酶抑制蛋白，在细胞周期中，抑制由G1期到S期的转化。p27kip1蛋白与周期素D-cdk4，周期素E-cdk2和周期素A-cdk2复合物结合，抑制他们在细胞周期中的活性。此蛋白的作用显示在细胞增生和分化中。近年来所发现的p27kip1基因及其产物对于细胞的生长有着极其重要的调控作用，并且在某些肿瘤组织和肿瘤细胞株中发现了p27kip1表达异常，提示其与肿瘤的发生发展有着密切的关系。最近，p27kip1在各类恶性肿瘤中表达的改变已经被描述，包括食道，胃，前列腺，乳腺，肺和甲状腺癌。现已发现p27kip1表达与回结肠癌患者的预后成负相关。 回结肠癌在美国是位于第四位的常见肿瘤，而且是癌症死亡第H大死因。据估计，在 1999年有 129，400新病例和 56，600例死亡的患者。在我国其发病率则居第4－6位。长江下游和东南沿海的江苏、上海、福建、台湾及香港等地区较高。中位发病年龄巧岁左右，男女性别比例为1．2：1，发病率有上升趋势。回结肠癌的组织学特点已经被发现具有预后意义，包括肿瘤侵犯深度，肿瘤分级，区域外大血管侵犯和瘤周淋巴反应。右半结肠癌常呈息肉样矽生式生长，肿块较大，分化差，产生细胞外粘蛋白和瘤周克隆样淋巴样反应。本实验旨在分析p27“”蛋白在原发性肿瘤中的表达情况及与组织学参数的关系和对预后的作用。 实验材料与方法 1．标本选择 总计76例，为随机选择病例。标本来源于辽宁省肿瘤医院大肠科1993年至1996年四年内右半结肠癌组织包埋标本。男性32例，女性44例。年龄23－79岁（平均61岁人全部患者都接受了结肠切除作为一种最初的根治性治疗。随访期五年以上。按WHO标准：采用 TNM分期，I／11期 38例，皿／N期 38例；组织学分级，I级25例，11级26例，皿级25例。通过免疫组化方法进行p27‘”‘及 hi67蛋白表达的检测。 2．主要试剂 P27“’‘鼠抗人单克隆抗体、Ki67鼠抗人单克隆抗体3－P试剂盒包括止液在液人液0液、DAB显色剂、多聚赖氨酸、兔疫组化笔等均购自福州 Maxim Biotechm。 3．实验方法 门川E染色：所有切片均作HE染色。 p）采用免疫组织化学S—P法进行组织染色，各步骤严格控制温度与时间。石蜡切片常规二甲苯脱蜡；100％s5％在5％、 ·2·75％酒精水化；高温高压、抗原修复Z A液3％过氧化氢，室温10分钟；PBS冲洗三次，每次 5分钟出液 10％正常山羊血清，37t孵育20分钟；去血清滴加一抗（p27＊一＼hi67），37 T孵育2小时；pBS冲洗三次，每次5分钟人液生物素标记的二抗工作液，刃℃孵育叨分钟；PBS冲洗三次，每次5分钟山液链霉素抗生物素蛋白－过氧化酶溶液，37℃孵育30分钟；PBS冲洗三次，每次5分钟；DAB显色，自来水充分冲洗；苏木素复染；中性树胶透明封片。 橱)对照：阳性对照为定购的阳性对照片，阴性对照用PBS代替一抗作阴性对照。 N)判定标准：P27“”、hi67阳性表达均定位于大肠癌的细胞核内，呈褐色或黄褐色颗粒。随机选择 10个高倍视野，以 p27“’‘阳性细胞占总数百分率进行分级：＜10％为(－X10啪－50％为(＋厂＞50％为（＋＋八 同理，Ki67阳性细胞数占总数的百分率520阮为（刁，＞20呢－40啪为（＋），＞40％为（＋＋）。 K）统计方法：采用统计软件SPSS10．0软件包，p27‘”与临床病理特征的关系使用X‘检验，p27‘”‘与 Ki67之间关系采用 Ken－dail等级相关分析。 结 果 一o27‘”‘在右半结肠癌组织中的表达 本组76例右半结肠癌标本中40例染色阳性，占52．6％，其中27例（35．5啪）表达为（十＋），13例（17．二％）表达为（＋），显示在附后图片中。 二o27“’‘表达与临床病理参数的关系 ”p27“”与下列临床病理参数显著相关：临床分期呈负相关卜二一 0．316，P二 0．004）、浸润深度呈负