第一章苯丙烯类天然产物的神经保护作用研究目的:检测苯丙烯类天然产物对NaN₃诱导的PC12细胞损伤的保护作用,挑选出保护作用最显著的反式-茴香脑;初步探索反式-茴香脑对NaN₃诱导的PC12细胞损伤的保护作用的可能机制;为苯丙烯类天然产物研究或治疗脑部重大疾病提供理论基础和实验依据。方法:1细胞的培养:复苏后的PC12细胞用DMEM高糖培养基-青霉素链霉素双抗液-胎牛血清（89-1-10）在37摄氏度和5%CO₂环境下培养。2建立NaN₃诱导PC12细胞的损伤模型:取对数期细胞以5-6×10³个每孔接种在96孔板中培养24小时,加入终浓度为9mM、18mM、27mM、36mM、45mM、54mM的NaN₃继续培养24小时后,采用CCK-8法检测NaN₃对PC12细胞增殖能力的影响。3苯丙烯类天然产物对PC12细胞和NaN₃模型细胞增殖能力的影响:取对数期细胞以5-6×10³个每孔接种在96孔板中培养24小时,以含10-200μM的苯丙烯类天然产物（反式-茴香脑、反式-细辛醚、顺式-细辛醚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚）的DMEM培养基单独培养48小时和分别预先培养8小时、16小时、24小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时,采用CCK-8法检测苯丙烯类天然产物对PC12细胞和NaN₃模型细胞增殖能力的影响。4反式-茴香脑对NaN₃模型细胞保护作用的可能机制:经反式-茴香脑（10μM和60μM）预先培养8小时后NaN₃（27mM）处理24小时的PC12细胞,采用倒置显微镜观察法和Hoechst33258荧光染色法检测反式-茴香脑对NaN₃诱导的PC12细胞凋亡的影响;采用酶标法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化;采用TBA法检测细胞内丙二醛（MDA）的含量改变;采用WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的含量多少;采用逆转录聚合酶链式扩增反应技术（RT-PCR）检测细胞中Cycs、Calm、Fas、Bax等基因的表达水平。5数据处理:采用统计学软件SPSS20.0进行数据分析处理;采用画图软件Graph Pad prism6.01进行数据画图。结果:1复苏后的PC12细胞随着培养时间的延长,细胞体现出神经细胞样状态,且生长迅速,能为后续的实验提供充足的细胞。2不同浓度的NaN₃均可以诱导PC12细胞的损伤,其中27mM组的细胞存活率约为正常对照组的50%,因此选择27mM处理细胞24小时为NaN₃诱导PC12细胞损伤的最佳模型浓度。3苯丙烯类天然产物（反式-茴香脑、反式-细辛醚、顺式-细辛醚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚）与PC12细胞培养48小时后,各药物组与正常对照组相对比,其细胞增殖率有所增加或者降低,但是没有显著性差异（P>0.05）;预先培养8小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时后,反式-茴香脑（10-100μM）、顺式-细辛醚（150-200μM）、甲基丁香酚（30μM）和甲基异丁香酚（30μM）的细胞增殖率与NaN₃模型组相比有显著性差异（P<0.05）,其余各药物浓度组的细胞增殖率与NaN₃模型组相比均没有差异性（P>0.05）;预先培养16小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时后,反式-茴香脑（30-60μM）、顺式-细辛醚（200μM）和甲基丁香酚（30μM）的细胞增殖率与NaN₃模型组相比有显著性差异（P<0.05）,其余各药物浓度组的细胞增殖率与NaN₃模型组相比均没有差异性（P>0.05）;预先培养24小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时后,反式-茴香脑（60μM）和顺式-细辛醚（200μM）的细胞增殖率与NaN₃模型组相比有显著性差异（P<0.05）,其余各药物浓度组的细胞增殖率与NaN₃模型组相比均没有差异性（P>0.05）。其中反式-茴香脑（10-100μM）预先培养8小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时后,其细胞增殖率比其他4种药物各浓度组较好,且在10-60μM范围内呈现剂量依赖,因此选择反式-茴香脑（10μM和60μM）预先培养8小时后加入终浓度为27mM的NaN₃继续培养24小时为后续的可能机制研究。4反式-茴香脑（10μM和60μM）预先培养8小时后NaN₃（27mM）处理24小时,反式-茴香脑组能够改善NaN₃造成的细胞形态的改变,减少凋亡细胞的数量;且反式-茴香脑组LDH和MDA含量均低于NaN₃模型组,而SOD含量高于NaN₃模型组,差异均有统计意义（P<0.05）;各实验组的Cycs、Calm、Fas、Bax等基因的表达正在实验中。结论:1苯丙烯类天然产物能对NaN₃诱导的PC12细胞有保护作用,且反式-茴香脑的保护作用更强;2反式-茴香脑通过改善细胞形态,减少凋亡细胞,降低LDH、MDA含量和增加SOD含量,减弱NaN₃对PC12细胞的损伤。第二章法卡林二醇天然产物的结构类似物的抗癌活性研究目的:癌症严重威胁现代社会人类的身体健康,因其癌细胞逐渐对多种抗癌药物产生耐药性,发现新的抗癌药物是十分迫切的。目前对于具有抗癌作用的先导化合物的发现途径主要通过从天然产物中发现、从现有抗癌药物通过结构修饰发现以及从机体的内源性物质中发现等途径。本实验室通过对现有抗癌药物法卡林二醇进行结构的修饰,合成了一系列化合物,从中筛选出15种产率和Ee值较高的法卡林二醇结构类似物,通过检测15种法卡林二醇结构类似物对人宫颈癌细胞HeLa细胞和人肝癌细胞HepG2细胞的抗癌活性,为后续的合成实验提供构效关系依据,从而发现更优的抗癌先导化合物。方法:1细胞的培养复苏后的HepG2细胞用DMEM高糖培养基-青霉素链霉素双抗液-胎牛血清（89-1-10）、HeLa细胞用RPMI1640培养基-青霉素链霉素双抗液-胎牛血清（89-1-10）在37摄氏度和5%CO₂环境下培养。2法卡林二醇结构类似物和5-氟脲嘧啶对HeLa细胞抗癌活性检测取对数期细胞以5-6×10³个每孔接种在96孔板中培养24小时,实验分为正常对照组和药物组,每组设3个复孔,分别加入15种法卡林二醇结构类似物和抗癌药物5-氟脲嘧啶继续培养48小时后,采用CCK-8法检测各组药物对HeLa细胞增殖抑制能力的影响3法卡林二醇结构类似物和5-氟脲嘧啶对HepG2细胞抗癌活性检测取对数期细胞以5-6×10³个每孔接种在96孔板中培养24小时,实验分为正常对照组和药物组,每组设3个复孔,分别加入15种法卡林二醇结构类似物和抗癌药物5-氟脲嘧啶继续培养48小时后,采用CCK-8法检测各组药物对HepG2细胞增殖抑制能力的影响4各组实验数据的处理采用统计学软件SPSS20.0和IC₅₀计算软件Graph Pad prism6.01进行数据分析处理,各组实验数据用IC₅₀±Std.表示。结果:115种法卡林二醇结构类似物和抗癌阳性药物5-氟脲嘧啶均能不同程度的影响HepG2细胞和HeLa细胞的增殖能力,其结构中有苯基和TIPS的,较其他基团,表现出更好的抗癌活性。2基于15种法卡林二醇结构类似物的的抗癌活性,本实验室合成了这15种法卡林二醇结构类似物的消旋体并进行了活性测定,结果显示15种法卡林二醇结构类似物的消旋体和抗癌阳性药物5-氟脲嘧啶液也能不同程度的影响HepG2细胞和HeLa细胞的增殖能力,其中1-5号和15号消旋体的增殖抑制能力明显优于异构体,且其结构中有苯基和TIPS的,较其他基团,表现出更好的抗癌活性。结论:115种法卡林二醇结构类似物的异构体和消旋体均能不同程度的影响HepG2细胞和HeLa细胞的增殖能力,且消旋体的增殖抑制能力强于异构体;2法卡林二醇类似物结构上有苯基和TIPS的,较其他基团,表现出更好的抗癌活性。