松针叶绿素-胡萝卜软膏对实验性大鼠胃溃疡的防治作用及其机制

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目的:   研究松针叶绿素-胡萝卜素软膏对实验性大鼠胃溃疡的防治作用,为松针药用价值的进一步开发提供理论依据和实验基础。   方法:   (1)通过小鼠急性毒性试验,初步评价其安全性。(2)将大鼠随机分为5组,分别为模型对照组(蒸馏水7.5ml/kg)、奥美拉唑对照组(0.018g/kg)和松针叶绿素-胡萝卜素软膏(0.75、1.5、2.25g/kg)组,各组每天给药一次,连续5天或7天。通过大鼠幽门结扎型、乙醇烧灼型和乙酸浸润型胃溃疡模型,观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏对各组大鼠胃粘膜损伤情况,溃疡面积,溃疡抑制率,胃液量、胃液pH值及胃蛋白酶活性,以及各组大鼠胃粘膜病理变化的影响。(3)通过倍比稀释法观察针叶绿素-胡萝卜素软膏对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)的体外抗菌作用,分别用最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)表示抗菌活性。(4)通过建立Hp合并乙醇烧灼型大鼠胃溃疡模型,结合测定溃疡面积,计算溃疡抑制百分率,检测血清和胃组织SOD、MDA、PGE2和GAS的含量,进一步观察和探讨松针叶绿素-胡萝卜素软膏的抗溃疡作用和机制。(5)最后用原始体积分数为10%、20%、40%的松针叶绿素-胡萝卜素软膏(2.25g/kg)灌胃大鼠含药血清,通过Real-timePCR和荧光素酶报告基因分析,从基因水平证实松针叶绿素-胡萝卜素软膏对胃泌素的调控。   结果:   (1)松针叶绿素-胡萝卜素软膏经口给药,小鼠最大耐受量(maximumtolerabledose,MTD)为20.0g/kg,说明其半数致死量(medianlethaldose,LDso)大于20.0g/kg。(2)松针叶绿素-胡萝卜素软膏能明显减少三种大鼠实验性胃溃疡模型的溃疡面积,且抑制率呈良好的量效关系,2.25g/kg剂量组疗效与奥美拉唑对照组相似/甚至优于奥美拉唑对照组。其中,在幽门结扎型胃溃疡中,松针叶绿素-胡萝卜素软膏三个剂量组均能抑制大鼠胃液分泌,提高胃液pH值和抑制胃蛋白酶活性,且呈现良好的量效关系,2.25g/kg剂量组的胃液pH值和胃蛋白酶活性与奥美拉唑对照组相似。(3)松针叶绿素-胡萝卜素软膏对Hp有体外抑菌和杀菌活性,其MIC均为15.625mg/ml,MBC为62.5mg/ml。(4)在松针叶绿素-胡萝卜素软膏对Hp合并乙醇烧灼型大鼠胃溃疡的研究中,发现三个剂量组均能减少Hp合并乙醇烧灼型大鼠胃溃疡面积,抑制率分别为31.47%、45.54%和53.96%,且呈现良好的量效关系,其中2.25g/kg剂量组疗效与奥美拉唑组相当,此外,三个剂量组均能增加血清和胃组织SOD、PGE2的含量,并抑制MDA、GAS的分泌,且呈现良好的量效关系,其中2.25g/kg剂量组与奥美拉唑组相近。(5)最后,松针叶绿素-胡萝卜素软膏能通过下调胃泌素启动子转录活性,抑制胃泌素mRNA表达。   结论:   (1)松针叶绿素-胡萝卜素软膏小鼠经口给药的LD50值大于20.0g/kg,说明该药毒性较小。(2)松针叶绿素-胡萝卜素软膏可有效减轻大鼠幽门结扎型、乙醇烧灼型及乙酸浸润型胃溃疡的胃粘膜损伤,其效应呈剂量依赖性,主要涉及减少胃液分泌、提高胃液pH值、降低胃蛋白酶活性、血清和胃组织中MDA、GAS含量、提高血清和胃组织中PGE2水平及SOD活力,以及抗Hp作用等,其抗溃疡作用机制可能与其减弱胃粘膜攻击因子、增加胃粘膜血流量、抗脂质过氧化作用和清除自由基作用加强等有关。
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