GABAB受体亚基在小鼠胚胎围植入期的表达特征研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rmprinthecb
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背景:γ-氨基丁酸(GABA)由谷氨酸脱羧酶合成,主要起抑制性神经递质的作用。GABA通常依赖于与离子型受体GABAA和GABAC,及代谢型受体GABAB的结合,从而激活下游信号调节生理功能。根据报道,GABA可以结合GABAA受体在非神经元和神经组织中参与并调节各种生理过程,而 GABAB受体主要在抑制突触传递中起关键作用。研究发现GABA激活B受体及其下游信号在神经发育以及各种神经精神疾病中起重要作用。GABA 不仅在中枢神经系统中发挥作用,随着研究的发现,GABA 还在外周组织和神经的生理过程中发挥着重要作用。已有研究表明,GABA可以通过调节下丘脑-垂体-性腺轴的激素分泌从而影响生殖系统,同时其他研究人员发现GABA对卵巢,输卵管等组织的功能都有直接调节作用,这些研究都表明GABA在妊娠过程中发挥着重要的作用,但是 GABA对于整个妊娠过程的具体作用仍然不明。以野生型小鼠为例,在正常妊娠期间,受精卵经过输卵管到子宫最终发育成囊胚,并在第 4 天晚些时候附着在子宫腔上皮上(通常以发现阴道栓的当天作为第一天)。囊胚粘附在子宫上皮进而起始子宫基质的蜕膜化,蜕膜化指的是子宫内膜基质细胞的增殖和分化。在子宫蜕膜化过程中,子宫内膜基质细胞的增殖和蜕膜化过程都对黄体酮信号有响应,其中包含多种细胞因子,基因交叉作用。胚胎植入的调节机制也十分复杂,涉及多种信号转导途径以及众多基因潜在参与。除了之前有关GABA在妊娠过程中的相关研究外,我们课题组也发现了妊娠期子宫中有明显GABA表达水平的变化,并且发现GABA/GABA信号转导途径抑制了子宫内膜基质细胞的增殖和蜕膜化。这些研究结果表明GABA 可能参与多种妊娠组织的相关调节,但目前整个妊娠过程中GABAB受体介导信号的具体作用仍然不明。
  目的:以胚胎围植入期的妊娠小鼠为研究对象,利用人工诱导蜕膜化、胚胎延迟植入、激素联合去卵巢小鼠模型和子宫基质细胞体外培养模型,探讨GABAB1在小鼠胚胎围植入期间的功能。
  方法:采用原位杂交和免疫组织化学方法检测 GABAB1在小鼠围植入期的时空表达模式,通过Western blot和QuantitativeRT-PCR (Quantitative real time-polymerasechainreaction)进一步确认,随后利用人工诱导蜕膜化、胚胎延迟植入、雌孕激素联合去卵巢模型以及体外培养的子宫内膜基质细胞来探讨 GABAB1在小鼠围植入期间的功能作用。
  结果:QuantitativeRT-PCR和Western blot的结果表明,Gabbr1的mRNA和GABAB1蛋白在正常妊娠D4-D6期间高表达,而原位杂交和免疫组织化学确定其定位在子宫内膜基质中。人工诱导蜕膜化模型中,对比没有诱导蜕膜化的对照组,GABAB1显著高表达在诱导蜕膜化的蜕膜区;而在胚胎延迟植入模型中,GABAB1表达在子宫基质上,而没有发生胚胎植入的对照组没有检测到明显的 GABAB1表达。以上两种模型的结果表明,GABAB1可能参与胚胎植入和子宫蜕膜化。然而,由于没有检测到 Gabbr2 的表达,提示单独的亚基 GABAB1可能不依赖和GABAB2形成完整的GABAB受体起作用。在激素联合去卵巢模型中检测到GABAB1表达水平无明显升高,表明雌激素(E2)和黄体酮(P4)对GABAB1表达没有明显的调节作用。为了避免因为Gabbr2表达含量过低导致不能检测到,而微量的Gabbr2仍然能组成完整的GABAB受体从而调节子宫基质细胞的功能,进一步使用GABAB受体激动剂和抑制剂处理子宫基质细胞。结果显示,和对照组相比,在加了激动剂或抑制剂的子宫基质细胞中,细胞的增殖和蜕膜化都没有显著差异,结合前面Gabbr2的检测结果,可以推断子宫基质细胞不受完整的GABAB受体信号调控。
  结论:GABA的B1亚基而不是完整的GABAB受体可能参与胚胎植入和子宫蜕膜化信号传导途径。
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